脂氧素A4誘導(dǎo)的人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞HO-1高表達(dá)的信號(hào)通路研究.pdf

1、目的:
　　研究脂氧素A4(AT-Lipoxin A4)誘導(dǎo)人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(Humanpulmonary microvascular endothelia cells，HPMECs)高表達(dá)血氧合酶1（HO-1）可能的細(xì)胞信號(hào)通路機(jī)制。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞。為了觀察LXA4誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)HO-1以及找到最適藥物濃度，我們將實(shí)驗(yàn)分為5組即Ⅰ對(duì)照組，Ⅱ LXA4(5ng/ml)處理組，ⅢLXA

2、4(25ng/ml)處理組，ⅣLXA4(50ng/ml)處理組和ⅤLXA4(100ng/ml)處理組。然后我們用western blot檢測(cè)HO-1表達(dá)水平。同時(shí)我們?cè)O(shè)計(jì)了另一個(gè)實(shí)驗(yàn)來(lái)研究LXA4誘導(dǎo)HO-1表達(dá)可能相關(guān)的信號(hào)通路，實(shí)驗(yàn)分組為(1)對(duì)照組(2) TNF-α(100ng/ml)刺激組、(3) TNF-α(100ng/ml)+PKC抑制劑組(4) LXA4(100ng/ml)單獨(dú)干預(yù)組(5) LXA4+PKC抑制劑組(6)

3、PKC通路激活劑PMA（佛波酯）刺激組。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)HPMECs細(xì)胞HO-1 mRNA表達(dá)水平;蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)方法檢測(cè)PKC、P-nrf2、HO-1等蛋白表達(dá)的量;細(xì)胞免疫熒光方法對(duì)HPMECs內(nèi)LXA4受體下游關(guān)鍵信號(hào)分子P-Nrf2的定位檢測(cè)。
　　結(jié)果:
　　(1)LXA4可以誘導(dǎo)HPMECs高表達(dá)HO-1，且呈劑量依賴型，本實(shí)驗(yàn)的最佳濃度為100ng/ml;
　　(2)LX

4、A4可以引起HPMECs內(nèi)PKC、P-Nrf2、HO-1蛋白水平升高;
　　(3)BisⅡ（PKC通路抑制劑）可以抑制LXA4誘導(dǎo)的HPMECs內(nèi)PKC、p-Nrf2蛋白水平的上調(diào)，可以抑制LXA4誘導(dǎo)的HO-1表達(dá)增加。
　　(4)PKC通路激活劑PMA可以引起HPMECs內(nèi)PKC、p-Nrf2磷酸化水平的上調(diào)，可以誘導(dǎo)HPMECs內(nèi)HO-1表達(dá)增加。
　　(5)TNF-α可以引起HPMECs細(xì)胞內(nèi)PKC、p-Nrf