HMGB1參與小鼠心臟移植慢性排斥反應的作用及其機制.pdf

1、背景：慢性排斥反應及其所致的移植物血管病變是移植心臟失功的主要原因，目前分子機制尚有不明之處。高遷移率族蛋白1（HMGB1）作為一種炎性介質，促進急性排斥反應的作用與機制已得到闡述，但在心臟移植慢性排斥反應中的作用及潛在機制迄今尚未見報道。
　　目的：探究HMGB1在小鼠心臟移植慢性排斥反應及移植物血管病變中的作用及細胞與分子機制。
　　方法：1.小鼠心臟移植慢性排斥反應模型制備：以 C57BL/6小鼠為受體， B6.C-H

2、-2bm12KhEg小鼠為供體建立了MHC-II分子錯配的小鼠心臟移植模型，可自發(fā)慢性排斥反應。
　　2. HMGB1阻斷抗體干預：抗HMGB1單克隆抗體處理，手術前一天、移植后每周兩次給予受者腹腔注射，持續(xù)四周，每次200μg。小鼠IgG作為同型對照抗體。
　　3.檢測方法與指標：
　　（1）免疫組化、免疫熒光檢測移植物的細胞浸潤及HMGB1、轉化生長因子β（TGF-β）的表達；
　?。?）H&E和EVG染色檢

3、測慢性排斥反應和心臟移植物血管病變；
　　（3）RT-PCR、Western Blot檢測HMGB1及TGF-β的表達；
　?。?）ELISA檢測血清、組織勻漿和細胞培養(yǎng)上清中相關細胞因子水平；
　?。?）流式細胞術檢測T細胞反應、調節(jié)性T細胞、同種抗體含量、巨噬細胞、樹突狀細胞（DC）成熟及其亞群；
　?。?）單向混合淋巴細胞培養(yǎng)檢測供者特異性同種T細胞應答。
　　結果：1.成功建立了小鼠腹腔異位心臟移植

4、慢性排斥反應模型，收獲的移植心臟標本在組織形態(tài)學上反映了慢性排斥反應、心臟移植物血管病變（CAV）和心肌纖維化發(fā)生、發(fā)展的過程。
　　2.HMGB1和TGF-β伴隨慢性排斥反應的發(fā)展而表達增多，HMGB1特異性中和性單克隆抗體處理受者，可顯著改善心臟移植慢性排斥反應介導的血管病變及移植物纖維化。
　　3.抗HMGB1單抗處理受者，對慢性排斥反應相關的細胞與分子的影響包括：
　　（1）對固有免疫細胞的影響：
　　抗

5、HMGB1單抗處理顯著減低移植物和外周淋巴器官中巨噬細胞的比例及成熟DC的比例和數(shù)量，尤其是與炎癥性DC（Inf-DC）享有類似表型的CD11b+Ly6Chigh成熟DCs亞群。
　　體外實驗表明在HMGB1或TGF-β1的單獨刺激下，小鼠骨髓來源樹突狀細胞（BMDC）表型成熟并向類似于Inf-DC亞群分化，同時HMGB1誘導成熟的DC亞群促使同種反應性T細胞增殖及Th1/Th17反應。
　?。?）對T細胞的影響：
　

6、　抗HMGB1單抗處理顯著降低受者針對供者的特異性細胞免疫應答如Th1/Th17反應，升高調節(jié)性T細胞的比例。
　　（3）對促炎因子的影響：
　　抗HMGB1單抗處理減少慢性排斥反應過程中心臟移植物內(nèi)炎性細胞的浸潤及炎性相關細胞因子的產(chǎn)生如TNF-α、IL-1β、TGF-β。
　　（4）對促纖維化關鍵分子TGF-β的影響：
　　抗HMGB1單抗處理后TGF-β表達水平降低，體外實驗證明HMGB1對TGF-β具有直

7、接促進作用，可以誘導小鼠心臟單個核細胞直接分泌有活性的TGF-β。
　?。?）不影響供者特異性體液免疫應答和補體反應。
　　結論：1. HMGB1參與了小鼠心臟移植慢性排斥反應和CAV的發(fā)展。其主要機制可能為：（1）促進心臟移植物浸潤的和受者脾臟中的DC成熟，促進供者特異性的Th17及Th1應答；（2）促進炎癥細胞分泌TGF-β，進一步增強炎癥反應及組織損傷、修復。
　　2.HMGB1特異性中和性抗體可顯著改善心臟移植