CDR3導(dǎo)向抗體庫技術(shù)人源化抗膀胱癌單抗BDI.pdf

1、中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所博士學(xué)位論文CDR3導(dǎo)向抗體庫技術(shù)人源化抗膀胱癌單抗BDI姓名：周麗君申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：王琰20030525H u m a n i z a t i o no fm o u s ea n t i —’b l a d d e r c a n c e rM c A bb yC D R 3d i r e c t e dp h a g ea n t i b o d yl i b r

2、a r yP h 。D ．C a n d i d a t e ： Z h o uL i j u nT u t o r ： W a n gg a nA b s t r a c to n t h e b a s i So fe p i t o p eg u i d e ds e l e c t i o n ．w ee x p l o r e da n e wm o u s em A bh u m a n i z a t i o n m e

3、t h o d - - - C D R 3 d i r e c t e dp h a g ea n t i b o d y l i b r a r y ．F i r a t ，F(xiàn) da n d Kg e n e s o fa na n t i —h u m a nb l a d d e rc a r e i n o m am A bB D l w e r eC l o n e db yR T —P C R ．S e q u e n c

4、i n ga n a l y s i ss h o w e dt h a tt h eV ka n d V H w e r ed e r i v e df r o mM K I Va n d ．Ⅷ3 Dr e s p e c t i v e l y ．F da n d Kg e n e sw e r et h e nC i o n e di n t ot h ee x p r e s s i n g v e c t o r p 3 M

5、H a n d e x p r e s s e d i n E c o l f ．U s i n g P C R m e d i a t e dm u t a g e n e s i S ．t h e K —t e r m i h a l s e q u e n c e o fv H r e g i o nW a S c o r r e c t e d a n dt h eb i d i n ga c t i v i t y W a S

6、o b v i o u s l y i m p r o v e d a f t e rt h e c o r r e c t i o n ．E L I S Aa n di m m u n o h i s t o c h e m i s t r y a n a l y s i S d e m o n s t r a t e d t h a t e x p r e s s e d F a b b i n d t ob l a d d e r

7、c a n c e rc e l l ss p e c i f i c a l l y 。S e c e n d ，A c c o r d i n gt ot h eo r i g i n a ls e q u e n c e so f m A bB D I ，o l i g o n u c l e o t i d ep r i m e r sc o n t a i n i n gt h eo r i g i n a lC D R 3s

8、 e q u e n c e so fm A bB D l w e r es y n t h e s i z e d ．T h r o u g ho v e r l a p P C R ，t h em o u s eV H a n d V K C D R 3 s w e r es p l i c et oh u m a n d i v e r s eF da n d K g e n e sa n dc l o n e d i n t o

9、 ap h a g ea n t i b o d y e x p r e s s i o n v e c t o rp A L ，i nw h i c h t h eF d a r ef l a n k e db y t w o n o n —h o m o l o g o u s l o x p s i t e s ，o b t a i n i n ga p r i m a r y p h a g ea n t i b o d y 1

10、 i b r a t yo f2 X 1 07 i ns i z e ．T h el i b r a r yp h a g e m i dw a st r a n s f e r r e d i n t o a C r e + b a c t e r i a B S l 3 5 5 w i t h h i g h m u l t i p l i c i t y o fi n f e c t i o n ( M O I ) ．T h r