HFRS患者PBMC中αβT細(xì)胞TCR CDR3譜系漂移的監(jiān)測及CDR3分子特征的分析.pdf

1、目的：初步分析腎綜合征出血熱（HFRS）患者外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中TCRB鏈和TCRa鏈各家族CDR3譜系漂移的變化；分析患者克隆性增殖家族（溶解曲線單峰）CDR3的分子特征。
　　 方法：采取15例HFRS患者及4例健康志愿者的外周血，提取外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，設(shè)計(jì)了26個(gè)人TRBV家族的特異性上游引物和一個(gè)共同的下游引物TRBC，34個(gè)人TRAV家族的特異性上游引物和一個(gè)共同的下

2、游引物TRAC，熒光定量PCR（FQ-PCR）擴(kuò)增26個(gè)人TRBV家族和34個(gè)人TRAV家族CDR3，溶解曲線法分析各TRBV和TRAV家族CDR3譜系的單、寡、多克隆增殖；并對(duì)β鏈和a鏈CDR3譜系中的克隆性增殖的家族進(jìn)行擴(kuò)增送測序，生物信息學(xué)分析克隆性增殖的TRBV和TRAV家族CDR3區(qū)的基因、氨基酸組成和特征。
　　 結(jié)果：（1）4例健康志愿者及15例HFRS患者PBMC中26個(gè)TRBV和34個(gè)TRAV家族CDR3的FQ

3、-PCR產(chǎn)物在1.5％瓊脂糖凝膠電泳上，多數(shù)家族CDR3在預(yù)測相應(yīng)大小處顯示一條模糊的條帶，HFRS患者部分家族無條帶；（2）4例健康志愿者PBMC中26個(gè)TRBV家族和34個(gè)TRAV家族的CDR3溶解曲線譜型為多克隆增生的分布；15例HFRS患者PBMC中26個(gè)TRBV家族和34個(gè)TRAV家族CDR3的溶解曲線譜型圖上，多數(shù)家族為多克隆增生的分布，但部分出現(xiàn)數(shù)量不等的單峰、寡峰、表達(dá)極低的峰圖，表現(xiàn)為不同的異常率[（單峰+寡峰+極低）

4、/總的TRBV或TRAV家族]：（3）β鏈和a鏈單克隆性增殖家族的CDR3區(qū)有著不同的基因序列和氨基酸組成，不同患者的CDR3存在部分的共同基序。
　　 結(jié)論：HFRS患者PBMC中β鏈和a鏈各家族CDR3溶解曲線譜型圖出現(xiàn)了單、寡、多克隆增殖家族，表現(xiàn)為不同的異常率；克隆性增殖的TRBV或TRAV家族有著不同的CDR3基因和氨基酸組成，但存在部分共同基序；提示HFRS患者外周血中存在克隆性增殖TRBV或TRAV家族的T細(xì)胞，為