參苓白術(shù)散對(duì)脾虛證小鼠血清蛋白質(zhì)組的影響.pdf

1、目的：①以科學(xué)的方法建立可靠的小鼠脾虛證動(dòng)物模型。
　?、谟肧DS-PAGE技術(shù)對(duì)小鼠血清蛋白質(zhì)組進(jìn)行初步分析。
　?、鄄捎秒p向凝膠電泳（2-DE）技術(shù)分析正常對(duì)照組（以下統(tǒng)稱正常組）、脾虛模型組（以下統(tǒng)稱模型組）、參苓白術(shù)散低劑量組（以下統(tǒng)稱低量組）和參苓白術(shù)散高劑量組（以下統(tǒng)稱高量組）血清的二維凝膠圖譜，對(duì)治療后表達(dá)差異明顯的蛋白點(diǎn)進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）鑒定分析。
　　方法

2、：①采用利血平單因素造模法建立脾虛證小鼠動(dòng)物模型，觀察各組小鼠一般情況、體重和飲食量的改變，并采用比色分析法及ELISA法分別測(cè)定各組小鼠血清D-xylose及Gastrin的含量進(jìn)行驗(yàn)證。
　?、谕ㄟ^SDS-PAGE技術(shù)對(duì)各組血清進(jìn)行分離,建立正常組、脾虛模型組、參苓白術(shù)散藥物組電泳圖譜。利用Quantity One圖像分析軟件對(duì)各組圖譜進(jìn)行對(duì)比分析,觀察其改變。
　?、鄯謩e收集正常組、模型組、高量組和低量組的血清樣本，對(duì)

3、樣本處理后分別進(jìn)行雙向凝膠電泳，并利用PDQuest8.0圖像分析軟件對(duì)2-DE圖譜進(jìn)行差異性分析。選取差異明顯的蛋白點(diǎn)進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜鑒定，檢索數(shù)據(jù)庫鑒定蛋白質(zhì)。
　　結(jié)果：①成功建立了可靠的的脾虛證動(dòng)物模型。
　?、趯?duì)小鼠血清蛋白質(zhì)組SDS-PAGE圖譜進(jìn)行分析后，三個(gè)組分離均得到20個(gè)條帶，脾虛模型組與正常組相比,脾虛模型組有7個(gè)條帶表達(dá)增強(qiáng)，3個(gè)條帶表達(dá)減弱，參苓白術(shù)散藥物組均能使脾虛組高表達(dá)的7

4、個(gè)條帶和低表達(dá)的3個(gè)條帶恢復(fù)到正常水平或趨于正常水平。
　?、劢?jīng)過比較分析四組血清電泳圖譜，有明顯差異的蛋白點(diǎn)有35個(gè)，對(duì)其中10個(gè)差異點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，成功鑒定出6種蛋白，分別為:beta-globin、vitamin D-binding protein、pregnancyzone protein、apolipoprotein A-I、apolipoprotein A-IV和albumin。
　　結(jié)論：①采用利血平單因素建立