復(fù)腎功方對(duì)慢性腎衰大鼠血清蛋白質(zhì)組學(xué)的影響.pdf

1、背景:慢性腎衰（Chronic renal failure，CRF）已成為影響人類健康的全球性問題，給社會(huì)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。而透析和腎移植是治療CRF的主要手段，目前還沒有發(fā)現(xiàn)特別有效的藥物來防治CRF的進(jìn)一步發(fā)展。復(fù)腎功方是首屆國醫(yī)大師郭子光教授經(jīng)過60余年臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)出的經(jīng)驗(yàn)方，由黃芪、水蛭、車前子、牛膝、丹皮、澤瀉、茯苓、山茱萸、山藥、生地、杜仲、黃柏、蒼術(shù)等藥物組成，主要用于CRF代償期及失代償期的非替代療法，CRF如果在早

2、期得到及時(shí)有效治療，對(duì)于阻止腎功能不可逆的改變具有重要意義。前期研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)腎功方能顯著降低CRF大鼠尿蛋白的含量，降低血肌酐（Serum creatinine，SCr）及血尿素氮（Blood urea nitrogen，BUN）水平，明顯改善腎功能和腎纖維化。但其作用機(jī)理尚不夠明確，還有待進(jìn)一步研究。
　　目的:本課題采用血清蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法，篩選出經(jīng)過復(fù)腎功方治療后的差異蛋白，分析差異蛋白參與的信號(hào)通路及其相互作用，并進(jìn)一

3、步研究復(fù)腎功方治療CRF的潛在生物學(xué)標(biāo)志物。
　　方法:隨機(jī)將SD雄性大鼠分成3組（正常組、模型組、復(fù)腎功方組），各11只。配制0.5%腺嘌呤飼料喂食模型組和復(fù)腎功方組大鼠，進(jìn)行慢性腎衰模型的制作；正常組大鼠給予普通飼料。每只大鼠按20g/d攝入量計(jì)算，持續(xù)21d。造模成功后，所有大鼠停用造模飼料，改用普通飼料。將0.9%NaCl溶液給正常組和模型組灌胃20mL/kg/d；對(duì)復(fù)腎功方組灌胃復(fù)腎功方煎劑，16g生藥/kg體重，30d

4、。通過iTRAQ技術(shù)nanoLC-MS/MS篩選出血清中的差異蛋白，并對(duì)鑒定后的蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析：分子功能、細(xì)胞位置、生物進(jìn)程的GO分析，信號(hào)通路分析，差異蛋白網(wǎng)絡(luò)分析。并采用ELISA、Western blot及qRT-PCR等技術(shù)對(duì)觸珠蛋白（HP）和α-1-抗胰蛋白酶（AAT）進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果:總共鑒定了417個(gè)蛋白質(zhì)。在正常組、模型組及復(fù)腎功方組的對(duì)比中共鑒定篩選出19個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，其中3個(gè)蛋白表達(dá)上調(diào)，16