應(yīng)用蛋白指紋圖譜技術(shù)對結(jié)直腸癌血清蛋白質(zhì)組的研究.pdf

1、目的：研討結(jié)直腸癌患者和健康受試者血清蛋白質(zhì)指紋圖譜波峰的不同之處，進而分析二者差異性表達的血清蛋白分子及其含量。從中篩選顯著差異性結(jié)直腸癌血清相關(guān)蛋白，建立蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫，構(gòu)建結(jié)直腸癌診斷模型，為早期診斷結(jié)直腸癌提供一種有效的方法。
　　 方法：運用蛋白質(zhì)指紋圖譜技術(shù)(SELDI-TOF-MS)分析結(jié)直腸癌及健康受試者血清樣本，采用IMAC3(Immobilized Metal Affinity Capture，金屬親和表面)芯

2、片。收集2010年5月～2011年5月南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院胃腸外科住院結(jié)直腸癌患者清晨空腹靜脈血，均經(jīng)內(nèi)鏡或手術(shù)組織病理確診，未經(jīng)放化療及其他治療手段干預(yù)，共134例，平均年齡53歲，男性為76例，女性為58例；健康受試者：共87例健康查體者，收集于本院健康體檢中心，平均年齡為49歲，男性52例，女性35例，血樣均取自患者清晨空腹?fàn)顟B(tài)，無影響血清中蛋白質(zhì)含量的其他相關(guān)疾病。分為訓(xùn)練集：74例結(jié)直腸癌患者[Dukes'A(n=8)、Duk

3、es'B(n=18)、Dukes'C(n=31)、Dukes'D(n=17)]、48例健康受試者；驗證集：60例結(jié)直腸癌患者[Dukes'A(n=7)、Dukes'B(n=24)、Dukes'C(n=17)、Dukes'D(n=12)]、39名健康受試者。應(yīng)用SELDI-TOF-MS檢測混合對照血清，利用蛋白質(zhì)指紋圖譜相關(guān)軟件對獲得的混合對照血清圖譜進行分析并計算其差異性，為變異系數(shù)(CV)值，設(shè)CV<15％。運用病例對照研究，利用蛋白

4、質(zhì)指紋讀取儀PBSⅡ-C分析訓(xùn)練集的血清蛋白樣本，獲得訓(xùn)練集中對比研究的樣本的蛋白質(zhì)分子含量。應(yīng)用Biomarker Wizard軟件對Protein Chip software處理后得到蛋白質(zhì)分子量、M/Z、含量等數(shù)據(jù)用方差檢驗進行統(tǒng)計學(xué)分析，計算均值、p值、SD。Biomarker Pattem軟件利用Biomarker Wizard軟件分析的數(shù)據(jù)采用決策樹模型進行數(shù)據(jù)挖掘，篩選出早期診斷結(jié)直腸癌的特異生物標(biāo)記物，構(gòu)建結(jié)直腸癌診斷模

5、型。之后用構(gòu)建的診斷模型，利用驗證集的血清樣本，進行盲法試驗，以此來檢查模型的效度。
　　 結(jié)果：分析混合對照血清蛋白質(zhì)譜圖，CV值為12.20％<15％，重復(fù)性良好、芯片不同的實驗誤差可接受，M/Z2000以下的峰濾去，避免可能的干擾峰出現(xiàn)。運用SELDI軟件程序，在M/Z2000-M/Z50000之間共檢測到216個蛋白質(zhì)波峰。對比結(jié)直腸癌患者和健康受試者蛋白質(zhì)波峰，發(fā)現(xiàn)78個蛋白質(zhì)波峰存在差異性，在結(jié)直腸癌患者血清樣本中有

6、26個蛋白質(zhì)波峰下調(diào)，52個上調(diào)。在78個存在差異性的蛋白質(zhì)波峰中，篩選出12個蛋白質(zhì)波峰：M/Z8132、M/Z4002、M/Z4070、M/Z8351、M/Z6341、M/Z4472、M/Z8446、M/Z11092、M/Z4875、M/Z7571、M/Z4435、M/Z5994(P<0.001)，具有統(tǒng)計學(xué)意義，構(gòu)建決策樹分析診斷模型。其中以M/Z8132、M/Z4002具有最佳結(jié)果，對結(jié)直腸癌患者和健康受試者具有鑒別意義。此診斷