HAS-2沉默對(duì)大腸癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響.pdf

1、目的：
　　本研究主要探討HAS-2沉默前后對(duì)大腸癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的影響以及HAS-2沉默前后對(duì)TGF-β調(diào)控EMT的影響。
　　方法：
　　帶FAM熒光標(biāo)記的陰性對(duì)照siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)siRNA轉(zhuǎn)染效率，篩選最佳轉(zhuǎn)染條件。之后用Real time PCR和Western blot分別從mRNA和蛋白水平檢測(cè)HAS-2 siRNA干擾效率。用Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后E-Cad

2、herin、Vimentin、Slug蛋白表達(dá)水平變化，用Real time PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后E-Cadherin、Vimentin、snail mRNA表達(dá)水平變化。用10ng/mlTGF-β1分別刺激轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞，用Western blot檢測(cè)刺激前后E-Cadherin、Vimentin蛋白水平變化，用Real time PCR檢測(cè)刺激前后E-Cadherin、Vimentin、snail mRNA表達(dá)水平變化。用免疫熒光法觀察

3、TGF-β1刺激及HAS-2沉默對(duì)E-Cadherin、Vimentin表達(dá)變化的影響。
　　結(jié)果：
　　1、轉(zhuǎn)染HAS-2 siRNA24小時(shí)后HAS-2 mRNA表達(dá)抑制率為(54.6±5.84)％;HAS-2蛋白在轉(zhuǎn)染48小時(shí)后表達(dá)抑制率為（40.5±5.32）％。
　　2、HAS-2 siRNA轉(zhuǎn)染48小時(shí)后E-Cadherin蛋白表達(dá)較陰性對(duì)照組上調(diào)，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);Vimentin蛋白及

4、Slug蛋白表達(dá)較陰性對(duì)照組下調(diào)，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3、用10ng/mlTGF-β1刺激后，未轉(zhuǎn)染HAS-2siRNA組細(xì)胞48小時(shí)后E-Cadherin蛋白水平下調(diào)，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);Vimentin蛋白表達(dá)明顯上調(diào)，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);已轉(zhuǎn)染48小時(shí)組細(xì)胞E-Cadherin蛋白表達(dá)水平明顯高于未轉(zhuǎn)染組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞Vimentin蛋

5、白表達(dá)水平較刺激前明顯上調(diào)，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞Vimentin蛋白表達(dá)水平較未轉(zhuǎn)染組明顯下調(diào)，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4、E-Cadherin mRNA在HAS-2siRNA轉(zhuǎn)染組的表達(dá)量上調(diào)，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);Vimentin mRNA及Snail mRNA在轉(zhuǎn)染組的表達(dá)量下調(diào)，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5、TGF-β1刺激未轉(zhuǎn)染HAS-2si

6、RNA組細(xì)胞，E-Cadherin mRNA水平較刺激前下調(diào)，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);Vimentin及Snail mRNA表達(dá)較刺激前明顯上調(diào)，差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。TGF-β1刺激已轉(zhuǎn)染24小時(shí)的細(xì)胞，E-Cadherin mRNA表達(dá)水平較刺激前明顯下調(diào)，較刺激未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞表達(dá)水平上調(diào)，差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);Vimentin及Snail mRNA表達(dá)水平均較刺激前明顯上調(diào)，較刺激未轉(zhuǎn)染組

7、表達(dá)水平下調(diào)，差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　6、經(jīng)熒光顯微鏡觀察，TGF-β1刺激前轉(zhuǎn)染HAS-2siRNA組細(xì)胞E-cadherin表達(dá)較未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增多，Vimentin表達(dá)較未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞減少;TGF-β1刺激后，未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞E-cadherin表達(dá)較刺激前減少，Vimentin表達(dá)較刺激前明顯增多;轉(zhuǎn)染組細(xì)胞E-cadherin表達(dá)較未轉(zhuǎn)染組增多，Vimentin表達(dá)較未轉(zhuǎn)染組明顯減少。
　　結(jié)論：