RNA干擾抑制MACC1對大腸癌細胞增殖及其與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化關(guān)系的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討采用RNA干擾方法抑制MACC1基因表達對大腸癌細胞SW620增殖及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響。
　　方法:本實驗用脂質(zhì)體LipofectamineTM2000介導(dǎo),將設(shè)計并合成的靶向MACC1特異性的MACC1-siRNA轉(zhuǎn)染入人結(jié)腸癌細胞株SW620,同時設(shè)立陰性對照和空白對照。倒置顯微鏡下觀察各組細胞的形態(tài)學(xué)變化。MTT檢測細胞增殖活性的變化情況,并繪出各組細胞的生長曲線。采用Western blot技術(shù)檢測空白組(正常非

2、轉(zhuǎn)染組)、陰性對照組和MACC1siRNA組細胞E-cadherin和Vimentin的表達。細胞免疫熒光染色觀察E-cadherin和Vimentin在SW620細胞中MACC1干預(yù)下的表達。激光掃描共聚焦顯微鏡觀察鬼筆環(huán)肽染色后細胞骨架微絲的變化。
　　結(jié)果:SW620細胞瞬時轉(zhuǎn)染效率約為70-80％。倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染MACC1-siRNA后,SW620細胞增殖明顯減弱,細胞數(shù)量減少。MTT結(jié)果顯示,與陰性對照組和空

3、白對照組相比,RNAi組細胞增殖能力明顯減弱(P均<0.05)。Western Blot結(jié)果顯示:與對照組相比,MACC1siRNA組Vimentin的表達顯著減弱(P<0.05),E-cadherin的表達顯著增強(P<0.05)。免疫細胞熒光結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染MACC1-siRNA能顯著降低SW620細胞的Vimentin的表達而促進E-cadherin的表達。激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)干擾MACC1表達后SW620細胞表面微絲減少,變稀

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