干細(xì)胞表型、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、YAP對(duì)腸癌術(shù)后患者預(yù)后的影響.pdf

1、目的:
　　通過對(duì)2012年在我院進(jìn)行手術(shù)切除的Ⅱ、Ⅲ期結(jié)直腸癌患者的47例病理標(biāo)本進(jìn)行蘇木精-伊紅染色及免疫組織化學(xué)染色，觀察干細(xì)胞表型CD44、CD133、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白E-cadherin、vimenin以及YAP的表達(dá)情況，并分析以上檢測(cè)因素與結(jié)直腸癌的各個(gè)高危因素，如年齡、性別、術(shù)前卡氏評(píng)分、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、術(shù)前有無腸梗的情況以及患者的3年生存率、無病生存期之間的關(guān)系，從而得出與腸癌術(shù)后患者的病理特性及

2、預(yù)后相關(guān)的因素，為下一步的實(shí)驗(yàn)和Ⅱ、Ⅲ期結(jié)直腸癌患者前期的用藥指導(dǎo)提供依據(jù)。
　　方法:
　　1.收集2012年在我院進(jìn)行結(jié)直腸癌切除術(shù)，具有明確的病理結(jié)果、并通過病理或影像學(xué)診斷為Ⅱ、Ⅲ期的結(jié)直腸的47例患者，同時(shí)記錄患者的年齡、性別、術(shù)前卡氏評(píng)分、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、術(shù)前有無腸梗的情況、術(shù)后有無行輔助化療等情況。
　　2.根據(jù)患者的病理切片選擇相對(duì)應(yīng)病理號(hào)的石蠟標(biāo)本。
　　2.石蠟標(biāo)本隨機(jī)編號(hào)，并制成

3、切片，分為5組。
　　3.將石蠟切片放入烤箱烤片、脫蠟機(jī)脫蠟。
　　4.先對(duì)石蠟切片進(jìn)行蘇木精-伊紅染色，將石蠟切片先后用蘇木精及伊紅染色液染色，無水梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。
　　4.對(duì)石蠟切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。對(duì)石蠟切片進(jìn)行烤片、脫蠟后，對(duì)vimentin、CD44、CD133、YAP組切片進(jìn)行高溫高壓修復(fù)，對(duì)E-cadherin切片進(jìn)行微波修復(fù)。
　　5.按試劑盒說明書步驟加入一抗、二抗及

4、HRP多聚物。
　　6.進(jìn)行DAB顯色。
　　7.蘇木素復(fù)染，分化、返藍(lán)，隨機(jī)抽取切片鏡下觀察。
　　8.觀察滿意后進(jìn)行梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。
　　9、風(fēng)干后，倒置顯微鏡觀察，記錄CD44、CD133、E-cadherin、vimentin、YAP表達(dá)情況，統(tǒng)計(jì)觀察結(jié)果。
　　10.在實(shí)驗(yàn)截尾時(shí)間進(jìn)行電話隨訪，統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的3年生存率及無病生存期。
　　11.將CD44、CD133、

5、E-cadherin、vimentin、YAP表達(dá)情況及各高危因素匯總，使用SPSS22統(tǒng)計(jì)軟件分析結(jié)果。
　　結(jié)果:
　?、?、Ⅲ期腸癌術(shù)后患者的病理標(biāo)本中，E-cadherin表達(dá)陽性率為85.1％，vimentin陽性率為97.9％，CD44陽性率為89.4％，CD133陽性率為71％，YAP陽性率為70％。E-cadherin、CD44、CD133以及YAP的表達(dá)均與患者的無病生存期有顯著關(guān)系(P＜0.05)。CD13

6、3的表達(dá)還與患者術(shù)前有無腸梗阻情況有顯著關(guān)系（P＜0.05）。另外，YAP與患者術(shù)前卡氏評(píng)分、術(shù)前有無腸梗阻情況、TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有顯著關(guān)系(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　E-caderin、vimentin、CD44、CD133、YAP在Ⅱ、Ⅲ期結(jié)直腸癌患者中高表達(dá)，但vimentin的高表達(dá)與臨床及病理特征及預(yù)后無顯著相關(guān)性，CD44、CD133、E-caderin、YAP的高表達(dá)與臨床及病理特征、預(yù)后之