基于神經(jīng)血管單元分析糖尿病復合腦缺血大鼠模型腦組織病理變化.pdf

1、目的：
　　1、復制糖尿病大鼠模型，觀察糖尿病因素對大鼠模型神經(jīng)血管單元結(jié)構(gòu)功能的影響；
　　2、建立糖尿病復合腦缺血模型，比較復合性腦缺血大鼠模型在缺血的不同時間點神經(jīng)血管單元結(jié)構(gòu)功能的改變。
　　方法：
　　1、造模：通過腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）建立糖尿病模型，尾部采血檢測大鼠血糖水平；制備大腦中動脈缺血模型，比較大鼠神經(jīng)血管單元功能的變化。
　　2、分組：實驗動物隨機分為正常對照組、糖尿病組，正常

2、對照組分為四組包括正常組、假手術(shù)組、單純腦缺血3d和7d組；糖尿病組四組，為糖尿病組，糖尿病假手術(shù)組，糖尿病復合腦缺血3d和7d組。用行為學功能檢測和TTC染色的方法，檢測不同組動物的行為差異，并檢測腦組織的梗死體積。
　　3、腹主動脈采血，用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測大鼠血清中TNF-α、IL-1、COX-2、vWF、NSE的表達量。
　　4、免疫組織化學方法比較各組大鼠腦組織 E-選擇素、VCAM-1、ICAM-1和C

3、D34的表達。
　　5、 Western Blot方法檢測大鼠腦組織皮層 E-選擇素、VCAM-1、CD34的蛋白表達。
　　6、透射電鏡觀察大鼠腦部梗死邊緣區(qū)細胞超微結(jié)構(gòu)的改變。結(jié)果:
　　1)糖尿病組與正常組比較
　?、偬悄虿〗M血清中TNF-α、IL-1、COX-2、vWF、NSE的表達量明顯增多，差異顯著(p<0.05)；腦組織中E-選擇素、VCAM-1、ICAM-1的表達增高，差異明顯（P<0.05），而

4、腦組織中CD34的表達量降低，有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　?、谔悄虿〗M神經(jīng)元外形規(guī)則，核周隙變窄，核仁致密，異染色質(zhì)減少，胞質(zhì)內(nèi)線粒體腫脹，嵴變淡、變少，高爾基復合體擴張，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的核糖體部分脫落水腫。
　　2)復合腦缺血組與單純腦缺血組相比較：
　?、偕窠?jīng)功能評分：各組之間差異性不明顯（p＞0.05）；復合缺血7 d組組間差值明顯，有統(tǒng)計學意義（p＜0.05），其它組組間差值無統(tǒng)計學意義。
　?、赥NF

5、-α、IL-1、COX-2在糖尿病組中的表達量均高于正常組，差異顯著統(tǒng)計學意義 p＜0.05；與正常組相比，單純腦缺血組模型在3 d、7 d中呈高表達趨勢，差異性明顯 p＜0.05；復合腦缺血組與糖尿病組比較，表達均降低，差異性顯著 p＜0.05。復合腦缺血3 d組與單純腦缺血3d組比較 TNF-α、IL-1的表達量降低、COX-2升高，復合7 d時各組均降低，差異性明顯，有統(tǒng)計學意義 p＜0.05。
　?、踲WF因子與正常組相比

6、，單純腦缺血3d、7d組和糖尿病及糖尿病假手術(shù)組血清中vWF因子的表達量升高，單純腦缺血7d組增加明顯有統(tǒng)計學意義（p＜0.05）；與糖尿病組比較，復合缺血組3d、7d組表達量量有所降低，復合缺血7d時其表達量最低，有統(tǒng)計學意義。
　?、苎?NSE的表達：與正常及正常假手術(shù)組相比：單純腦缺血3d、7d組和糖尿病及糖尿病假手術(shù)組表達量增加，差異顯著（p＜0.05）。與單純腦缺血3d組相比，復合腦缺血3d組血清中的含量降低有統(tǒng)計學意

7、義（p＜0.05）。與糖尿病及其假手術(shù)組相比：復合腦缺血3d和7d組血清中表達量降低，其中7d組降低比較明顯，有統(tǒng)計學意義。
　?、莨Ｋ肋吘墔^(qū) E-選擇素、VCAM-1、ICAM-1、CD34的表達：糖尿病大鼠模型中E-選擇素、VCAM-1、ICAM-1的表達量增加。復合缺血結(jié)果顯示，糖尿病復合腦缺血大鼠模型3d、7d組中E-選擇素、VCAM-1、ICAM-1的表達高于正常組，但一般較單純腦缺血相應時間點組低。梗死邊緣區(qū) CD34

8、的表達發(fā)現(xiàn)，與正常組相比，缺血組和糖尿病組表達量均下降，復合腦缺血組的表達量高于糖尿病組。
　　⑥大鼠腦組織皮層 E-選擇素、VCAM-1、CD34中蛋白的表達與免疫組化檢測大鼠腦組織梗死邊緣區(qū)的表達相似，E-選擇素、VCAM-1、在單純、復合腦缺血和糖尿病組的含量有上升趨勢，復合腦缺血7d組與3d組比較其表達量下降。CD34在缺血組和糖尿病組其含量下降，復合腦缺血較糖尿病組表達有所上升。
　?、呷毖吘墔^(qū)的形態(tài)結(jié)構(gòu)和超微結(jié)

9、構(gòu)的變化：糖尿病復合腦缺血與單純性腦缺血比較：缺血3d組均出現(xiàn)組織結(jié)構(gòu)疏松，大量的神經(jīng)細胞壞死，細胞水腫排列不規(guī)則，膠質(zhì)細胞增生，神經(jīng)元異染色質(zhì)降解，線粒體嵴變短、稀疏，核糖體脫落；血管內(nèi)皮細胞腫脹，突觸小泡減少。缺血7d組水腫程度有所減輕，缺血邊緣區(qū)出現(xiàn)形態(tài)結(jié)構(gòu)正常的神經(jīng)元，膠質(zhì)細胞增生明顯，內(nèi)皮細胞水腫減輕。另一方面糖尿病復合腦缺血觀察其形態(tài)損傷較單純性腦缺血嚴重。
　　結(jié)論:
　　1、糖尿病模型可使血管內(nèi)皮損傷，激活膠