慢性缺血大鼠腦內(nèi)神經(jīng)血管單元的病理研究.pdf

1、目的：慢性腦白質(zhì)損傷是指各種原因?qū)е碌拈L期的腦灌注不足，促使腦發(fā)生組織病理及生化變化，已經(jīng)被證實(shí)是腦動脈硬化、血管性癡呆、Alzheimer病和Binswanger病等多種疾病的共同病理過程。目前研究認(rèn)為腦白質(zhì)損傷(White matter lesions,WML)大多是慢性缺血作用的結(jié)果。以往的研究大多重視急性期缺血大鼠病理及分子生物學(xué)改變。本研究對于缺血后存活1個月至3個月的慢性缺血大鼠腦內(nèi)神經(jīng)血管單元的病理改變作為重點(diǎn)研究。腦白質(zhì)

2、損傷可破壞神經(jīng)元之間、皮質(zhì)和皮質(zhì)下中樞之間的信號傳遞，導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙或步態(tài)異常，最終導(dǎo)致持久性或進(jìn)展性認(rèn)知與神經(jīng)功能障礙。研究目的在于觀察慢性腦缺血后神經(jīng)血管單元病理變化規(guī)律，以探討腦缺血早期VEGF和GFAP對神經(jīng)血管單元產(chǎn)生保護(hù)作用。
　　 方法：將60只Wister大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組及雙側(cè)頸動脈結(jié)扎法制作的慢性腦缺血模型，假手術(shù)組30只，缺血30只，制備腦缺血模型后分別于3d、7d、14d、1月、3月將動物處死，盡可能

3、在缺血后存活1個月至3個月以上。每個時間段5只灌注取腦，用HE染色觀察大鼠腦內(nèi)病理改變，免疫組化方法觀察不同時間段神經(jīng)血管單元的動態(tài)病理變化。免疫組化選用GFAP、VEGF、Laminin分別觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞以及基底層改變，在400倍光學(xué)顯微下，計數(shù)5個視野的陽性細(xì)胞數(shù)或微血管數(shù)，取平均值。采取單因素方差分析方法。用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 結(jié)果：(1)HE染色假手術(shù)組大部分

4、細(xì)胞形態(tài)正常，偶有神經(jīng)元細(xì)胞變性、死亡。模型組缺血3天可見海馬及皮質(zhì)區(qū)血管周圍及組織間隙水腫，神經(jīng)元皺縮，細(xì)胞腫脹，中性粒細(xì)胞浸潤，噬神經(jīng)變性。缺血7天，組織間隙及血管周圍水腫有所減輕，開始出現(xiàn)神經(jīng)元變性壞死，星形膠質(zhì)細(xì)胞增生及微血管增生，隨著缺血時間的延長，組織間隙及血管周圍水腫消失，微血管增生明顯，正常神經(jīng)元數(shù)目減少，排列紊亂，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則排列紊亂，胞質(zhì)內(nèi)有不均勻空泡，(2)免疫組化染色：與假手術(shù)組相比，缺血3d、7d、14d、1

5、月、3月GFAP表達(dá)有持續(xù)進(jìn)行性增加趨勢，且星形膠質(zhì)細(xì)胞總體及各組之間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，提示反應(yīng)性星型膠質(zhì)細(xì)胞缺血后增生，缺血3個月大鼠腦內(nèi)GFAP可見膠質(zhì)瘢痕組織生成。VEGF在缺血3d開始表達(dá)有增加，缺血7d、14d繼續(xù)增加且三組與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，這一現(xiàn)象與前人報道一致。缺血1個月、3個月VEGF表達(dá)較急性期有減少但仍較假手術(shù)組增多。Laminin在缺血3d即可出現(xiàn)表達(dá)減少，缺血7d時

6、減少最明顯，缺血14d開始增加。缺血1月和3月時Laminin表達(dá)呈逐漸增多趨勢，提示細(xì)胞外基質(zhì)在慢性缺血過程中逐漸增厚，Laminin的堆積起到主要作用。統(tǒng)計學(xué)顯示缺血1個月、3個月Laminin的表達(dá)與假手術(shù)組相比均有顯著差異(P＜0.05)，提示缺血早期Laminin迅速降低，后期異常堆積。
　　 結(jié)論：
　　 (1)證實(shí)了大鼠雙側(cè)頸動脈結(jié)扎缺血模型同樣是慢性腦缺血后神經(jīng)血管單元損害的成功模型(2)缺血早期神經(jīng)元和

7、膠質(zhì)細(xì)胞同時受損，皺縮、腫脹，后期嗜酸性變和壞死，隨著缺血時間的延長膠質(zhì)細(xì)胞增生，同時伴有血管新生。
　　 (3)慢性腦缺血后在缺血不同時間段神經(jīng)元、GFAP、VEGF、Laminin呈現(xiàn)規(guī)律的變化，GFAP在缺血早期產(chǎn)生堅固骨架和營養(yǎng)神經(jīng)作用，后期增生肥大瘢痕形成產(chǎn)生負(fù)面影響，VEGF在缺血全過程都起到積極地作用，可能對以后的治療有重要作用，Laminin早期減少提示缺血，晚期堆積可加重動脈粥樣硬化。同時三者之間相互影響、相互