rhG-CSF對糖尿病腦缺血大鼠神經(jīng)功能缺損及BDNF表達(dá)的研究.pdf

1、目的： 缺血性腦梗死是最常見的腦血管病變之一。腦組織梗死后，大量的神經(jīng)細(xì)胞缺血壞死，最后形成膠質(zhì)瘢痕。由于成年中樞神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)元不能夠再生，因此一旦發(fā)生梗死，有功能的腦組織就會(huì)減少，這是腦缺血致殘的根本原因。糖尿病和腦梗塞二者之間的關(guān)系密切，往往合并，且相互影響。 腦缺血損傷可以刺激腦內(nèi)成熟的間質(zhì)細(xì)胞或星形膠質(zhì)細(xì)胞返回到神經(jīng)干細(xì)胞，重新分化成受損最嚴(yán)重的細(xì)胞類型(主要是神經(jīng)元)，從而可能發(fā)揮修復(fù)和重排神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)的作用。

2、然而，腦缺血損傷后僅僅調(diào)動(dòng)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行自我修復(fù)的程度是不夠的。近年來的研究發(fā)現(xiàn)骨髓干細(xì)胞具有多項(xiàng)分化潛能，它攜帶了人體全部基因組，可同時(shí)對骨骼肌、心肌和神經(jīng)系統(tǒng)等受損組織進(jìn)行修復(fù)，而且易于被外源性基因轉(zhuǎn)染，便于基因操作，可用于自體移植。國內(nèi)外有不少研究者開始進(jìn)行成體干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的研究以及將其應(yīng)用于治療腦血管疾病的實(shí)驗(yàn)。其中神經(jīng)干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞是研究得較多的兩種成體干細(xì)胞，可分化為神經(jīng)元。近年來興起的自體骨髓干細(xì)胞動(dòng)員

3、治療，尤其是G-CSF動(dòng)員骨髓干細(xì)胞治療急性心肌梗死實(shí)驗(yàn)和臨床研究已初顯成效，為治療急性腦梗死提供了一種簡便易行的新方法。BDNF可使TrkB的表達(dá)上調(diào)，阻止短暫性腦缺血后海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的死亡。BDNF能明顯減小局灶性腦缺血大鼠的梗死面積，增加bcl-2的表達(dá)，減少bax的表達(dá)，從而通過對凋亡與抗凋亡因子的調(diào)節(jié)來實(shí)現(xiàn)其神經(jīng)保護(hù)功能。此外，神經(jīng)營養(yǎng)因子在軸突分支的過程中起一定的作用。本研究擬觀察經(jīng)過rhG-CSF干預(yù)之后，局灶性腦缺血

4、動(dòng)物的神經(jīng)功能和腦缺血周邊區(qū)BDNF表達(dá)的變化，探討rhG-CSF治療糖尿病腦缺血的作用。 方法： 選用體重200-250gWistar大鼠。腹腔注射四氧嘧啶制備糖尿病模型，6周后采用線栓法建立大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞(middlecerebralarteryocclusion，MCAO)模型。模型建立后，36只大鼠隨機(jī)分成對照組、G-CSF組，每組又分7d、14d和21d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每一時(shí)間點(diǎn)均為6只大鼠。rhG-CSF干預(yù)

5、組術(shù)后每日頸部皮下注射rhG-CSF50μg/kg，對照組注射等量的生理鹽水。采用Chen等[12]制定的神經(jīng)功能評分標(biāo)準(zhǔn)(modifledmeurologicalseverityscores，mNSS)分別于術(shù)后1d、7d、14d及21d對大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評分。各組于術(shù)后7d、14d、21d分別取6只大鼠進(jìn)行免疫組化法檢測BDNF蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 手術(shù)1，7，14，21d干預(yù)組的神經(jīng)功能缺損評分分別為7.67±0.

6、59，4.83±0.75，3.00±0.63，1.33±0.52，對照組分別為7.72±0.57，6.33±0.52，4.66±0.52，3.33±0.82，干預(yù)組明顯低于對照組，差別有顯著性(P＜0.01)。干預(yù)組梗死邊緣區(qū)的BDNF免疫陽性細(xì)胞數(shù)較對照組明顯增加，腦缺血7d、14d、21d缺血周邊區(qū)BDNF蛋白免疫陽性細(xì)胞光密度值均明顯高于對照組(P＜0.01)。 結(jié)論： 粒細(xì)胞集落刺激因子可增加糖尿病腦缺血之后梗死