維甲酸誘導(dǎo)人大腸癌細(xì)胞腫瘤免疫原性的改變.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文維甲酸誘導(dǎo)人大腸癌細(xì)胞腫瘤免疫原性的改變姓名：汪璇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：王蕓慶20000401主要組織相容性抗原I 類分子( M H C - C l a s s - - I ) 的表達(dá)情況。由于維甲酸對(duì)不同的細(xì)胞系作用特點(diǎn)可以不同，目前對(duì)于維甲酸誘導(dǎo)人大腸癌細(xì)胞系C l o n e A 細(xì)胞的免疫原性改變情況尚未見報(bào)導(dǎo)。鑒于維甲酸處理的腫瘤細(xì)胞作為腫瘤疫苗時(shí)兼有免疫原性強(qiáng)，細(xì)胞惡性表型降低，

2、細(xì)胞分化( ( ：e l lD i f f e r e n t i a t i o n ) 等多種特征，因此，進(jìn)一步研究維甲酸處理的細(xì)胞作為腫瘤疫苗應(yīng)用的可能性將有一定意義。。在此基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)選擇了低分化、高侵襲的人大腸癌細(xì)胞系C l o n e A 作為靶細(xì)胞進(jìn)行研究。因考慮到人大腸癌腫瘤相關(guān)抗原L E A ( L a r g eE x t e r n a lA n t i g e n ) 在高、中分化人大腸癌細(xì)胞系C C L l

3、8 7 、C C L 2 2 9 中有較高表達(dá)，而在低分化細(xì)胞系C l o n e A 中則低表達(dá)，并且C l o n e A 細(xì)胞具有較強(qiáng)的侵襲力，因此設(shè)想應(yīng)用維甲酸誘導(dǎo)分化后可能會(huì)產(chǎn)生較為顯著的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并且對(duì)揭示L E A是否為人大腸癌細(xì)胞表面的分化標(biāo)志抗原提供一定線索。實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用1 0 “M 濃度A T R A 誘導(dǎo)人大腸癌細(xì)胞系C l o n e A 細(xì)胞不同時(shí)間，即3 天( R 3 ) 、5 天( R 5 ) 和7 天( R

4、 7 ) 后，分別應(yīng)用小鼠抗人單克隆抗體A n t i —H L A ～A B C 、A n t i —H L A —D R 、A n t i —C D 5 4 、A n t i —C D H a 、N D 一1 作為第一抗體，F(xiàn) I T C 標(biāo)記的羊抗小鼠I g G 作為第二抗體，進(jìn)行間接免疫熒光染色，立即上流式細(xì)胞儀( F A C S ) 檢測(cè)C l o n e A 細(xì)胞表面與免疫原性相關(guān)的抗原分子表達(dá)情況。這些免疫分子包括M H

5、C 分子即人類白細(xì)胞抗原1 、I I 類分子( H L A —C l a s s —I 、I I ) 、細(xì)胞闖粘附分子一1 ( I —C A M 一1 ／C D 5 4 ) 、淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原一1 ( L F A 一1 ／C D l l a )和L E A 。經(jīng)平均相對(duì)熒光強(qiáng)度測(cè)定，結(jié)果顯示維甲酸處理3 天即可見瘤細(xì)胞表面H L A —I 類分子表達(dá)，且逐漸增高，可～直持續(xù)到第7 天；I C A M 一1 和L E A 在第5 天開