γ干擾素激活JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑引起系膜細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積.pdf

1、目的：探討γ干擾素是否激活JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑引起系膜細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積，以及HMGB1、SREBP-1和FAS是否參與這一過程。
　　 狼瘡性腎炎(LN)是自身免疫系統(tǒng)疾病一系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)所引起的腎臟炎性病變。LN伴有腎臟不同病理類型的免疫性損傷和腎臟損傷引起的不同臨床表現(xiàn)即高血壓、高血糖、高血脂，而高血壓病、糖尿病、高脂血癥是相互伴隨、相互促進(jìn)的關(guān)系，可進(jìn)一步加重SLE的病情和病死率。目前雖然系統(tǒng)紅斑狼瘡詳細(xì)發(fā)

2、病機(jī)制尚未明確，但免疫細(xì)胞功能異常和細(xì)胞因子失衡是SLE發(fā)病機(jī)制核心已得到公認(rèn)。γ干擾素(IFN-γ)是SLE發(fā)病過程中重要的細(xì)胞因子，具有促進(jìn)發(fā)病，加重病情的雙重作用，并與腎臟損傷密切相關(guān)。同時(shí)臨床及實(shí)驗(yàn)研究表明：SLE病人基本都伴有脂質(zhì)代謝異常和腎臟病變，而脂質(zhì)代謝異常又可以加重腎臟病變，腎臟病變可以引起脂代謝異常。前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在狼瘡性腎炎發(fā)病過程中存在脂代謝異常和高遷移率族蛋白1(HMGB1)高表達(dá)。大量研究顯示，HMGB1

3、可與固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1(SREBP-1)相互作用，繼而上調(diào)脂肪酸合成酶(FAS)，參與體內(nèi)脂質(zhì)代謝。INF-γ能否通過上調(diào)HMGB1、SREBP-1的表達(dá)引起脂質(zhì)沉積，JAK/STAT信號(hào)途徑是否參與這一過程?目前尚不清楚。
　　 因此本研究在以往實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)之上，以MC為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過觀察γ干擾素是否影響JAK1、p-JAK1、JAK2、p-JAK2、STAT1、p-STAT1、HMGB1、SREBP-1、FAS的表達(dá)，并分

4、析其表達(dá)變化與MC內(nèi)脂質(zhì)沉積的關(guān)系；JAK特異性抑制劑AG490能否減輕脂質(zhì)沉積的程度，闡明γ干擾素作為狼瘡性腎炎發(fā)病過程中重要的細(xì)胞因子與脂質(zhì)沉積之間的關(guān)系及其可能分子機(jī)制，為闡明狼瘡性腎炎發(fā)病過程中脂代謝異常的分子機(jī)制、臨床選擇有效治療方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：常規(guī)培養(yǎng)小鼠系膜細(xì)胞(MMC)，無血清培養(yǎng)基同步化12h后分為正常對(duì)照組、IFN-γ(500IU/ml)刺激組和INF-γ+AG490（INF-γ500 IU/

5、m1+AG490200μmol/ml）組，于IFN-γ刺激后0，2，4，6，8，12h收取不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞蛋白和總RNA。
　　 1、western blot檢測(cè)細(xì)胞p-JAK1、JAK1、p-JAK2、JAK2、p-STAT1、STAT1的蛋白表達(dá)和STAT1蛋白入核情況。
　　 2、western blot、RT-PCR檢測(cè)HMGB1、SREBP-1、FAS的蛋白及mRNA表達(dá)。
　　 3、油紅O染色檢測(cè)細(xì)胞

6、內(nèi)脂質(zhì)沉積情況。
　　 結(jié)果：
　　 1、IFN-γ能夠促進(jìn)小鼠系膜細(xì)胞JAK、STAT1磷酸化和STAT1核轉(zhuǎn)位IFN-γ刺激組(IFN-γ group)的細(xì)胞在0、2、4、6、8、12h各時(shí)間點(diǎn)p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1的蛋白表達(dá)較正常培養(yǎng)組升高；各時(shí)間點(diǎn)之間相比，非磷酸化JAK1，JAK2和STAT1蛋白表達(dá)未見明顯區(qū)別，但p-JAK1、p-JAK2和p-STAT1蛋白表達(dá)隨著刺激時(shí)間的延長(zhǎng)，表達(dá)增

7、強(qiáng)，呈時(shí)間依賴性。IFN-γ能夠上調(diào)系膜細(xì)胞核內(nèi)STAT1蛋白的表達(dá)，并隨著刺激時(shí)間的延長(zhǎng)，表達(dá)升高。特異性JAK抑制劑AG490能夠降低IFN-γ介導(dǎo)的JAK1，JAK2，STAT1的活化，在(IFN-γ+AG490)組0、2、4、6、8、12h時(shí)p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1蛋白表達(dá)較IFN-γ刺激組(IFN-γ group)明顯降低，并呈時(shí)間依賴性。
　　 western blot結(jié)果亦顯示，AG490預(yù)處理I

8、FN-γ刺激后(IFN-γ+AG490)在0、2、4、6、8、12h時(shí)STAT1核蛋白表達(dá)明顯低于IFNγ單獨(dú)刺激組（IFN-γ group），并呈時(shí)間依賴性。
　　 2、IFN-γ能夠上調(diào)系膜細(xì)胞中HMGB1、SREBP-1、FAS mRNA及蛋白表達(dá)，并隨著刺激時(shí)間延長(zhǎng)，其相對(duì)表達(dá)量呈上升趨勢(shì)。
　　 3、AG490預(yù)處理后，系膜細(xì)胞中HMGB1、SREBP-1、FAS mRNA及蛋白表達(dá)降低，并隨時(shí)間延長(zhǎng)呈下調(diào)趨勢(shì)