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1、目的:應(yīng)用大鼠腦缺血再灌注模型和細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型,研究JAK-STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因表達變化及藥物的作用。 方法:線栓法制備大鼠大腦中動脈栓塞模型,體外培養(yǎng)小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株制備缺氧復(fù)氧模型,用SuperArray公司的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)發(fā)現(xiàn)者基因芯片和JAK-STAT信號途徑基因芯片來分析模型組和對照組基因表達的差異,并通過實時定量PCR方法對其中部分基因進行驗證。采用實時定量PCR方法分析藥物對細(xì)胞缺氧復(fù)氧后STAT2、STAT
2、5A、STAT5B、STAT6、SOCS4、PIAS2、PIAS3和PIAS4表達的影響。 結(jié)果:大鼠腦缺血2h再灌注24h缺血側(cè)海馬與正常側(cè)比較,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Jak-Stat信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路表達上調(diào),Jak-Stat信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)基因上調(diào)的有STAT2、STAT5A、STAT5B和STAT6,下調(diào)的有JAK3;受體中上調(diào)的有MC-SF-R、Fcgr1、IFNAR1、IL-2Rg,下調(diào)的有EGFR和IFNAR2
3、;核因子及與STAT相互作用的因子中上調(diào)的有Mcmd5、Ncoa1、NF-κB1、Sfpi1、Sp1、Stub1,下調(diào)的有c-JUN、Smad5、c-src、Stam;STAT誘導(dǎo)表達的基因中上調(diào)的有Tnfrsf6(Fas)、Maf;JAK-STAT轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的副調(diào)控因子中上調(diào)的有PIAS2、Pias3、Pias4、Socs4,經(jīng)實時定量PCR方法驗證,STAT2、STAT5A、STAT5B、STAT6、SOCS4、PIAS2、PIAS3
4、和PIAS4與芯片結(jié)果一致。小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株缺氧4h復(fù)氧18h后與正常組比較,Jak-Stat信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)基因上調(diào)的有JAK1、Jak2、Tyk2、STAT1、STAT2、STAT4、STAT5A、STAT5B和STAT6;受體中上調(diào)的有prolactin受體、IL-2Rg,下調(diào)的有IL-4R;核因子及與STAT相互作用的因子中上調(diào)的有Mcmd5、Neoa1、NF-κb1、Sfpi1、Sp1、Stub1,下調(diào)的有Smad4;S
5、TAT誘導(dǎo)表達的基因中上調(diào)的有Tnfrsf6(Fas)、Maf、MMP3;JAK-STAT轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的副調(diào)控因子中上調(diào)的有PIAS2、Pias3、Pias4、Socs4。經(jīng)實時定量PCR方法驗證,與在體實驗相同的8種基因結(jié)果與芯片結(jié)果一致。在體與細(xì)胞模型JAK-STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因比較,大部分基因的變化是一致的。細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型中己酮可可堿中劑量可以刺激STAT2、STAT5A、STAT6、PIAS2、PIAS3的表達,而歐芹素乙無顯
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