干預NF-kB信號通路對新生大鼠大腦皮層神經元死亡的影響.pdf

1、[目的]
　　 觀察干預NF-κB通路對神經元NF-κB活化的規(guī)律以及神經元死亡包括自噬、凋亡和壞死的影響。
　　 [方法]
　　 取24小時內出生的大鼠，取大腦皮層后進行原代培養(yǎng)神經元，經細胞免疫化學鑒定為神經元后，將培養(yǎng)的神經元分為空白組、激活組、抑制組，其中抑制組細胞先加入激活劑后再加入抑制劑。各組再分別分成五個時間點組1h、6h、12h、24h、48h。各時間組再分別作免疫細胞熒光觀察NF-κB蛋白的表達

2、，Westernblot觀察自噬蛋白Beclin1的表達，Annexin V/PI雙染色法檢測細胞凋亡和壞死。
　　 [結果]
　　 1.激活組在各個時間點的NF-κ B蛋白表達均高于抑制組和空白組，激活組從6h到24h，NF-κ B蛋白表達逐漸增加，24h達到高峰，48h稍下降。抑制組各個時間點的NF-κ B蛋白表達均小于激活組，各時間點兩兩比較有顯著的統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　 2.凋亡在激活組表達高

3、于抑制組和空白組，分別與空白組和抑制組比較，6h-48h均有顯著統(tǒng)計學意義(p<0.01)；凋亡在抑制組表達高于空白組，12h-48h時間點內抑制組和空白組兩兩比較均有顯著統(tǒng)計學意義(P≤0.01)。
　　 3.壞死在激活組和抑制組中的表達隨時間的增加而增加，激活組在各個時間點內壞死表達均高于抑制組，尤以24h、48h明顯(p<0.01)。
　　 4.激活組自噬蛋白Beclin1隨時間增加而增高，24 h時神經元表達Be

4、clin1蛋白的量最多，48h時Beclin1蛋白仍有較多表達；Beclin1蛋白在各時間點內激活組分別與抑制組和空白組比較，均高于抑制組和空白組，有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　 [結論]
　　 應用NF-κ B激活劑佛波醇酯(PMA)干預神經元可以促使NF-κ B蛋白的表達量升高，并且隨時間的增加而升高，24h達到高峰，48h稍下降；NF-κ B通路激活后早期(1h-24h)神經元以自噬和凋亡為主，后期(24