EPA、DHA對脂多糖刺激大鼠系膜細胞保護作用的機制研究.pdf

1、腎臟疾病如IgA腎病(IgA nephropathy, IgAN)、腎小球腎炎等是常見的原發(fā)性腎小球疾病，部分患者可能進展為終末期腎病，危害人們的健康。轉(zhuǎn)化生長因子βi(transforming growth factor beta1，TGF-β1)、整合素連接激酶(integrin-linked kinase，ILK)、β1整合素（β1 integrin）及過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferators

2、-activated receptor gamma, PPARγ）等與腎臟病的進展有著十分密切的關(guān)系。同時，細胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)代謝失衡，合成增多或降解減少導(dǎo)致的ECM蛋白組分過度積聚是腎小球硬化的主要病理特征。
　　 魚油由深海魚類中提取，含豐富的n-3多不飽和脂肪酸(n-3 polyunsaturated fatty acid，n-3 PUFA)，其主要活性成分是二十碳五烯酸(eic

3、osapentaenoic acid，EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid，DHA)。魚油除具有抗血栓、舒血管、調(diào)血脂、抗腫瘤等經(jīng)典作用外，還具有一定的腎臟保護作用，延緩腎臟疾病的進展。
　　 本實驗通過脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）致大鼠腎小球系膜細胞（glomerular mesangial cells，GMCs）損傷模型觀察EPA和DHA對GMCs MMPs、PPARγ

4、、ILK、βi整合素、TGF-βi表達的影響，探討其對損傷的GMCs可能的保護機制，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 取對數(shù)生長期GMCs，常規(guī)培養(yǎng)24h后，換無血清培養(yǎng)24h，使細胞同步于G0期。分為：正常對照組；LPS（模型組，LPS10.0mg/L）組：EPA（10μmol/L、100μmol/L）組；DHA(10μmol/L、100μmol/L)組，其中用藥組均用含LPS培養(yǎng)基培養(yǎng)。各組分別培養(yǎng)24

5、h、48 h后，進行指標測定。
　　 1采用ELISA法觀察EPA和DHA對LPS刺激GMCs TGF-βi分泌的影響：
　　 2采用SDS-PAGE gelatinzymopraphy法分析EPA和DHA對LPS刺激GMCsMMP-2、9活性的影響；
　　 3采用Western Blot法觀察EPA和DHA對LPS刺激GMCs PPARγ和ILK蛋白表達的影響；
　　 4采用RT-PCR法觀察EPA和D

6、HA對LPS刺激GMCs PPARγ、ILK、β1整合素及TGF-β1 mRNA表達的影響；
　　 結(jié)果：
　　 1 EPA、DHA對LPS刺激GMCs TGF-β1的影響
　　 LPS刺激下，GMCs TGF-βi合成分泌和mRNA的表達較正常對照組增加EPA和DHA可使LPS誘導(dǎo)的GMCs TGF-β1合成分泌和mRNA的表達下降。
　　 2 EPA、DHA對LPS刺激GMCs MMP-2，9活性的影

7、響
　　 LPS刺激下，GMCs MMP-2，9合成分泌較正常對照組減少；EPA和DHA使LPS誘導(dǎo)的GMCs MMP-2，9合成分泌增加
　　 3 EPA、DHA對LPS刺激GMCs PPARγ表達的影響
　　 LPS可使GMCs PPARγ mRNA和蛋白表達下降；EPA和DHA可增加LPS誘導(dǎo)的GMCs PPAR mRNA和蛋白的表達。
　　 4 EPA、DHA對LPS刺激GMCs ILK表達的影響

8、
　　 LPS可增加GMCs ILK mRNA和蛋白的表達；EPA和DHA可使LPS誘導(dǎo)的GMCs ILK mRNA和蛋白表達下降。
　　 5 EPA、DHA對LPS刺激GMCsβ1整合素mRNA表達的影響
　　 LPS可增加GMCsβ1整合素mRNA的表達；EPA和DHA可使LPS誘導(dǎo)的GMCsβ1整合素mRNA表達下降。
　　 結(jié)論：
　　 1 EPA和DHA可以降低LPS誘導(dǎo)的GMCs TG