人工蟲草對STZ誘導的糖尿病大鼠腎臟足細胞保護作用及機制研究.pdf

1、目的：糖尿病腎臟疾病(diabetickidneydisease，DKD)是糖尿病(diabetesmellitus，DM)危害最大的微血管并發(fā)癥之一。目前慢性低度炎癥被認為是DKD主要發(fā)病機制之一。DKD早期主要表現(xiàn)為蛋白尿。當足細胞出現(xiàn)損傷、脫落時，能夠引起腎小球濾過屏障的破壞和蛋白尿的發(fā)生，導致腎小球進行性硬化。單核細胞趨化蛋白-1(monocytechemoattractantprotein-1，MCP-1)是一種強效趨化因子，

2、使各種炎性細胞尤其是單核細胞向病變部位聚集?，F(xiàn)有研究認為MCP-1在DKD蛋白尿發(fā)生過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。吡格列酮(Pioglitazone，PIO)是噻唑烷二酮類藥物，其可以通過調(diào)節(jié)糖脂代謝、改善胰島素抵抗、改善炎癥等途徑發(fā)揮腎臟保護作用。冬蟲夏草(Cordycepssinensis(Berk.)Sacc，CS)為麥角菌科真菌寄生在蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上的子座及幼蟲尸體的復(fù)合體，傳統(tǒng)醫(yī)學認為有補肺腎、益虛損之功效。既往研究發(fā)現(xiàn)蟲草制劑對DK

3、D有一定的治療作用，但具體機制尚不明確。本研究通過一次性尾靜脈注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)的方法，建立1型糖尿病大鼠模型，并應(yīng)用人工發(fā)酵蟲草菌絲體干粉(金水寶)和吡格列酮(艾汀)進行干預(yù)，觀察實驗動物腎臟組織中MCP-1及nephrin、desmin的蛋白表達變化情況，探討MCP-1與nephrin在糖尿病腎臟病變足細胞損傷發(fā)生發(fā)展中的潛在關(guān)聯(lián)，以及人工蟲草和吡格列酮的腎臟保護作用機制。
　　方法：從90

4、只雄性8周齡SD大鼠中隨機抽取10只作為正常對照組(CON組)，其余作為實驗組。實驗組大鼠一次性尾靜脈注射大劑量STZ(45mg/kg)。所有成模大鼠根據(jù)血糖水平分層后，隨機分為糖尿病組(DM組)，CS小劑量組(L組，0.6g/kg.d)，CS中劑量組(M組，2.5g/kg.d)，CS大劑量組(H組，5g/kg.d)和吡咯列酮組(PIO組，4mg/kg.d)。成模8周處死。留取血、尿標本分別檢測腎功能、血脂和尿微量白蛋白。光鏡和電鏡下觀

5、察各組大鼠腎臟病理組織學改變，通過免疫組化、免疫熒光方法觀察足細胞裂孔膜蛋白nephrin、損傷蛋白desmin，炎癥反應(yīng)標志物MCP-1表達水平的變化。RT-PCR檢測腎組織中nephrin的表達。
　　結(jié)果：1.DM組大鼠可見局灶性腎小球體積增大，系膜及其基質(zhì)增生，部分腎小球萎縮；大量腎小管上皮細胞空泡變性，刷狀緣消失；可見腎間質(zhì)片狀、灶狀炎性細胞浸潤。電鏡觀察顯示腎小球毛細血管基底膜不規(guī)則增厚，系膜區(qū)增寬，足突腫脹、間隙變小

6、，局部足突融合。PIO和各CS干預(yù)組與DM組比較，足突融合減輕，基底膜平均厚度減少；其中H組和PIO組效果類似，明顯優(yōu)于L組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。2.DM組大鼠腎皮質(zhì)MCP-1表達較CON組明顯增加，腎小球、腎間質(zhì)、腎小管均有強陽性表達，與DM組比較各PIO和CS治療組大鼠腎皮質(zhì)。MCP-1表：達水平均有不同程度降低；其中H組和PIO組效果類似，明顯優(yōu)于L、M組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。3.DM組大鼠WT-1陽性

7、細胞數(shù)目較CON組明顯減少，與DM組比較。PIO和CS治療組大鼠WT-1陽性細胞數(shù)目均有不同程度增加，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其中H組和PIO組效果類似，優(yōu)于L、M組，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。4.DM組大鼠nephrin表達較CON組明顯減低，DM組大鼠desmin表達較CON組明顯增加。PIO及各CS治療組nephrin表達量較DM組有所升高，其中H組和PIO組效果類似，明顯優(yōu)于L、M組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0

8、.05)。PIO及各CS治療組desmin表達量顯著低于DM組(P<0.05)，其中H組和PIO組效果類似，明顯優(yōu)于L、M組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)5.DM組大鼠nephrinmRNA水平較CON組、PIO、M、H組比較均明顯降低，差異均具有統(tǒng)計學意義；其中H組和M組效果類似，優(yōu)于PIO組和L組，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：1.STZ誘導建立的DM大鼠模型，早期即可出現(xiàn)明顯的足細胞數(shù)目減少、nephr