DHA減輕脂多糖介導(dǎo)的新生大鼠腦白質(zhì)損傷研究.pdf

1、目的：腦室周圍白質(zhì)軟化（periventricular leukomalacia，PVL）是一種常見腦白質(zhì)損害，常常與腦癱相關(guān)。在PVL發(fā)病機制上除缺血/再灌注損傷之外，母親或者胎兒感染引起細胞因子介導(dǎo)的腦損傷起著重要作用。有研究顯示LPS 經(jīng)孕鼠給藥可引起胎腦細胞因子表達增加，如IL-1β、TNF-α和IL-6等。DHA積聚于圍產(chǎn)期哺乳動物腦部皮質(zhì)，對神經(jīng)細胞軸突的延伸和新突起的形成和突觸功能有重要作用。本課題旨在研究DHA 對LPS

2、介導(dǎo)Sprague-Dawley大鼠腦白質(zhì)損傷的效應(yīng)。
　　 方法：實驗動物Sprague-Dawley大鼠分為LPS組、對照組和DHA 干預(yù)組。LPS組大鼠于孕17d和18d(足月22.5d）連續(xù)兩天給予 LPS(350μg/kg）懸液腹腔注射，構(gòu)建宮內(nèi)感染大鼠模型；對照組同時間予同劑量無菌鹽水注射（NS組）；DHA 干預(yù)組大鼠于孕期給予每日一粒魚油（DHA 130mg）灌胃，于孕17d和18d 予同劑量LPS腹腔注射。取孕2

3、0、21d和生后1、3、7、14d(P1、P3、P7、P14）胎鼠和新生鼠腦標(biāo)本用Real-time PCR 方法檢測細胞因子（TNF-α和 IL-6）在mRNA 水平的表達情況，同時通過免疫組化方法檢測髓鞘基質(zhì)蛋白（myelin basic protein，MBP）及膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）蛋白表達情況來評價胎鼠及新生鼠腦損傷情況。
　　 結(jié)果：實驗中各組孕鼠

4、經(jīng)腹腔注射后活動、進食均正常。LPS組孕鼠有1例術(shù)后流產(chǎn)，1例死產(chǎn)。DHA 干預(yù)組無1例流產(chǎn)。LPS組新生鼠出生時間較NS組提前12小時。LPS 處理的動物生后第一天與對照組相比在吸吮及肢體活動上沒有明顯的區(qū)別。LPS組新生鼠平均出生體重較DHA 干預(yù)組組明顯減低（p<0.05）。孕鼠胎盤組織HE染色可見LPS組間質(zhì)明顯增生，毛細血管腔變窄，并可見炎性浸潤。而DHA 干預(yù)組炎性浸潤減輕，血供較LPS組豐富。對照組P7 新生鼠腦室周圍MB

5、P表達，且LPS組較NS組陽性染色細胞明顯減少、染色淺（1.73±0.35* vs 2.15±0.53，p<0.05）。MBP在14d 新生鼠海馬表達明顯，且LPS組較NS組表達減弱（2.18±0.56*vs 2.52±0.36，p<0.05）；但GFAP 在7d 新生鼠海馬和白質(zhì)的表達LPS組較NS組表達陽性染色細胞明顯增加、染色深（海馬1.96±0.54* vs 1.23±0.35，p<0.05；白質(zhì)2.17±0.24* vs 1.

6、53±0.11p<0.05）。GFAP 在14d 新生鼠皮質(zhì)和白質(zhì)中能觀察到，LPS組較NS組表達增強（皮質(zhì)1.89±0.31* vs 0.83±0.25，p<0.05；白質(zhì) 2.32±0.39* vs 1.92±0.24，p<0.05）。MBP 陽性染色DHA組較同日齡LPS組增強（p<0.05）；GFAP 陽性染色DHA組較同日齡LPS組減輕（p<0.05）。Real-time PCR 方法檢測到細胞因子TNF-α和 IL-6 整體

7、水平LPS組較對照組上升，有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）。DHA組的TNF-α和IL-6 整體水平較LPS組下降，有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），DHA組的TNF-α和IL-6 整體水平較對照組上升，有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），但每個時間點各有差異。
　　 結(jié)論：宮內(nèi)LPS感染可導(dǎo)致胎盤組織以及胎兒的炎性反應(yīng)，導(dǎo)致新生鼠低出生體重及以低髓鞘化和反應(yīng)性星形膠質(zhì)化為特征的WMD。DHA是魚油的一種重要成分，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育成熟不可