大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞Rho激酶對p-Smad1核遷移的作用及機(jī)制.pdf

1、目的：
　　 揭示Rho激酶對p-Smadl核遷移的作用及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，探討它們在肺血管重構(gòu)中的作用機(jī)制。
　　 材料與方法：
　　 分離培養(yǎng)大鼠遠(yuǎn)端肺動脈平滑肌細(xì)胞，應(yīng)用PDGF-BB啟動肺動脈平滑肌細(xì)胞Rho激酶信號通路，應(yīng)用BMP-2啟動BMP信號通路，并用Rho激酶抑制劑Y-27632、MEK抑制劑-U0126進(jìn)行干預(yù)。培養(yǎng)細(xì)胞分成五組：(1)對照組；(2)BMP-2組；(3)BMP-2+PDGF-BB組

2、：(4)BMP-2+PDGF-BB+Y-27632組；(5)BMP-2+PDGF-BB+U0126組。免疫熒光染色標(biāo)記p-Smadl在細(xì)胞核內(nèi)外的分布并計(jì)算p-Smadl核遷移陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)（即核遷移率）。分離平滑肌細(xì)胞核蛋白和胞漿蛋白，western blotting分析p-Smadl在細(xì)胞內(nèi)的總量和細(xì)胞核內(nèi)外相對含量的變化。Cell Counting Kit-WST-8試劑盒檢測細(xì)胞增殖。
　　 結(jié)果：
　　 BMP

3、-2組p-Smadl在細(xì)胞內(nèi)的總量以及在細(xì)胞核中的相對含量和核遷移率明顯高于對照組(p＜0.05):BMP-2+PDGF-BB組p-Smadl的核遷移率和在細(xì)胞核中的相對含量明顯低于BMP-2組(p＜0.05)，但是細(xì)胞內(nèi)p-Smadl總量無明顯改變(p＞0.05);BMP-2+PDGF-BB+Y-27632組和BMP-2+PDGF-BB+U0126組細(xì)胞內(nèi)p-Smadl的總量以及在細(xì)胞核中的相對含量和核遷移率與BMP-2組基本相似(p

4、＞0.05)。BMP-2組，OD值明顯小于對照組(p＜0.05);PDGF-BB+BMP-2組，OD值明顯大于BMP-2組(p＜0.05)且大于對照組(p＜0.05)；BMP-2+PDGF-BB+Y-27632組和BMP-2+PDGF-BB+U0126組OD值均小于PDGF-BB+BMP-2組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 在大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞，PDGF-BB激活的Rho激酶通過MEK/ERK1/2抑制BMP-