姜黃素對(duì)低O-,2-大鼠離體肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響及其作用機(jī)制.pdf

1、目的:
　　 采用離體培養(yǎng)SD(Sprague-Dawley)大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(pulmonaryarterial smooth muscle cells,PASMCs),研究姜黃素(curcumin,cur)對(duì)低O2肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖和骨橋蛋白(osteopontin,OPN)表達(dá)的影響。
　　 方法:
　　 用25cm2無菌培養(yǎng)瓶培養(yǎng)SD大鼠離體肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,將同源同代細(xì)胞隨機(jī)分為5組,分別為正常對(duì)

2、照組(N組),24小時(shí)低O2對(duì)照組(0組),24小時(shí)低O2培養(yǎng)加入5μmol/L姜黃素組(Ⅰ組),24小時(shí)低O2培養(yǎng)加入10μmol/L姜黃素組(Ⅱ組),24小時(shí)低O2培養(yǎng)加入25μmol/L姜黃素組(Ⅲ組),低氧氧濃度為5％,各組DMSO濃度均為0.01％。采用圖像分析、免疫細(xì)胞化學(xué)法、CCK-8(cell counting kit-8)、實(shí)時(shí)熒光定量多聚酶鏈反應(yīng)(real-timequantitative PCR,RT q-PCR)

3、、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA)等方法,分別觀察培養(yǎng)的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的形態(tài),測(cè)定α-肌動(dòng)蛋白(α-SM actin)鑒定平滑肌細(xì)胞,測(cè)定OPN表達(dá)及其基因表達(dá)水平,其中CCK-8法檢測(cè)各組吸光度(Absorbance,A)值大小作為細(xì)胞相對(duì)數(shù)的比較,并應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS16.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果:
　　 1、CCK-8法測(cè)定各組肺動(dòng)脈平滑

4、肌細(xì)胞吸光度值(A值),測(cè)定結(jié)果示,0組較N組細(xì)胞增殖有顯著性差異(P<0.01),提示低氧刺激肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖。Ⅰ～Ⅲ組較0組細(xì)胞增殖減少(P<0.01),提示姜黃素對(duì)低氧刺激肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖有抑制作用,不同濃度姜黃素之間的比較顯示,姜黃素10μmol/L較5μmol/L更能抑制低氧下肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖作用(P<0.05),25μmol/L姜黃素抑制低氧刺激細(xì)胞增殖作用較5μmol/L、10μmol/L,強(qiáng)(P<0.01)。

5、提示姜黃素從5μmol/L開始,隨著濃度的增高,對(duì)低氧下肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的抑制作用增強(qiáng)。
　　 2、Elisa測(cè)定OPN相對(duì)表達(dá)量結(jié)果顯示,0組較對(duì)照組(N組)骨橋蛋白的相對(duì)表達(dá)量增加(P<0.01),提示低氧能刺激骨橋蛋白相對(duì)表達(dá)量增高。Ⅰ～Ⅲ組OPN。相對(duì)表達(dá)量較0組減少(P均<0.01),表明姜黃素有抑制低氧肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞OPN表達(dá)的作用。其中2.5μmol/L姜黃素與其他濃度之間比較,25μmol/L姜黃素較5μm

6、ol/L更能抑制低氧OPN相對(duì)表達(dá)量增加(P<0.01),25μmol/L姜黃素較10μmol/L OPN相對(duì)表達(dá)量的平均值減少,但兩者比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),提示姜黃素從5μmol/L開始,對(duì)低氧刺激OPN相對(duì)表達(dá)量增高隨著濃度的增高抑制作用增強(qiáng)。
　　 3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定OPN mRNA相對(duì)表達(dá)量結(jié)果顯示,正常對(duì)照組(N組)與低氧未加藥組(0組)比較,低氧刺激能顯著提高骨橋蛋白mRNA相對(duì)表達(dá)量(P<0.0

7、1)。Ⅰ～Ⅲ組OPN mRNA相對(duì)表達(dá)水平較0組減少(均P<0.05),提示姜黃素對(duì)低氧OPN mRNA相對(duì)表達(dá)水平有抑制作用。其中姜黃素25μmol/L(Ⅲ組)較5μmol/L(Ⅰ組)能明顯降低低氧下平滑肌細(xì)胞骨橋蛋白mR_NA的相對(duì)表達(dá)量(P<0.05),25μmol/L較10μmol/LOPN mRNA相對(duì)表達(dá)量均數(shù)及變化倍數(shù)均數(shù)降低,但兩者比較無顯著性差異(P>0.05),提示姜黃素從5μmol/L開始具有抑制低氧刺激OPN m

8、RNA相對(duì)表達(dá)量增高的作用,并呈濃度依賴性增高。
　　 4、對(duì)CCK-8測(cè)定各組肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞吸光度平均值與OPN相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行Pearson直線相關(guān)分析,r=0.807,P<0.001,有顯著性差異,提示肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖與OPN相對(duì)表達(dá)量兩者之間存在正相關(guān)。
　　 結(jié)論:
　　 1、姜黃素可抑制低O2離體大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖。
　　 2、姜黃素抑制OPN及其基因表達(dá)可能是其抑制低O2肺動(dòng)脈平