槲皮素對MCT誘導(dǎo)大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞作用及TGF-β1對HPAECs作用研究.pdf

1、[目的]
　　 觀察槲皮素對野百合堿誘導(dǎo)的大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞的作用，探討槲皮素對降低肺動脈高壓大鼠肌性動脈比例增加的作用；觀察TGF-β1誘導(dǎo)人類肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞向平滑肌樣細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，探討其在肺動脈高壓肺部無肌小動脈肌化過程中的作用，為進(jìn)一步研究肺動脈高壓時肺血管重構(gòu)機(jī)制提供參考依據(jù)。
　　 [方法]
　　 將成年雄性SD大鼠40只，隨機(jī)分4組：正常對照組(對照組)、MCT誘導(dǎo)的肺動脈高壓組(MCT組)、槲皮素預(yù)

2、防組(預(yù)防組)和槲皮素治療組(治療組)，每組10只。對照組一次皮下注射等量生理鹽水飼養(yǎng)21天后，再以生理鹽水(2mL/d)每日灌胃一次，共20天。MCT組：一次皮下注射野百合堿(50mg/kg)飼養(yǎng)21天后，再以生理鹽水(2mL/d)每日灌胃一次，共20天。預(yù)防組：一次皮下注射野百合堿(50mg/kg)，第二天起以槲皮素100mg/(kg.d)每日灌胃一次，共20天。治療組一次皮下注射野百合堿(50mg/kg)飼養(yǎng)21天后，以槲皮素10

3、0mg/(kg.d)每日灌胃一次，共20天。到達(dá)實驗終點后，肺組織切片用免疫組化法觀察大鼠肺部小血管肌層中α-SMA肌動蛋白的變化，并觀察肺動脈的形態(tài)學(xué)變化；取培養(yǎng)4代的人肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞，用0.08％的胰蛋白酶消化后調(diào)節(jié)濃度至每毫升1×105接種于的6孔和96孔培養(yǎng)板，待細(xì)胞長到70％～80％時，96孔板：96孔培養(yǎng)板每組4個平行樣本。于37℃、5％CO2、飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5小時(待細(xì)胞70％-80％貼壁)，更換含不同濃度槲皮素的新

4、鮮培養(yǎng)基。繼續(xù)培養(yǎng)48小時后MTT檢測水溶性槲皮素對人肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖的抑制作用；6孔板：將試驗組分為4組：空白組、TGF-β1誘導(dǎo)組1、2、3，誘導(dǎo)組中每組的板孔分別用5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mLTGF-β1進(jìn)行誘導(dǎo)；空白組為不加誘導(dǎo)劑TGF-β1的陰性對照。免疫熒光檢測平滑肌特異性標(biāo)志物α-SMA肌動蛋白的表達(dá)，結(jié)合形態(tài)學(xué)鑒定平滑肌樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化。
　　 [結(jié)果]
　　 1.槲皮素能降低的肺動

5、脈高壓大鼠肺血管平滑肌層細(xì)胞的增殖。
　　 2.槲皮素可以抑制肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖且其抑制作用呈濃度依賴性。
　　 3.10ng/mL TGF-β1能誘導(dǎo)肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞向表達(dá)α-SMA肌動蛋白的平滑肌樣細(xì)胞轉(zhuǎn)分化。
　　 [結(jié)論]
　　 槲皮素在動物體內(nèi)能夠抑制肺血管小動脈中平滑肌細(xì)胞的增殖，具有一定的抗肌化作用；體外培養(yǎng)的人肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞有抑制其增殖作用；TGF-β1具有在體外誘導(dǎo)成熟人類肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞