P2X-,3-受體在大鼠不同發(fā)育階段疼痛中的作用研究.pdf

1、疼痛的研究目前成為臨床的熱點(diǎn),針對(duì)疼痛的發(fā)生、傳導(dǎo)等機(jī)制的研究可以為臨床治療提供新的思路。疼痛發(fā)生、傳導(dǎo)過(guò)程涉及到眾多的神經(jīng)纖維、神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞等,通過(guò)不同的受體及通道傳遞疼痛的信號(hào)。P2X3受體選擇性的分布在傷害性感受器細(xì)胞,在疼痛的發(fā)生、傳導(dǎo)中發(fā)揮重要作用。通過(guò)P2X3受體的激動(dòng)劑、特異性的抑制劑和RNAi技術(shù)抑制P2X3受體表達(dá)的研究發(fā)現(xiàn),P2X3受體在不同的疼痛模型,如炎性痛和神經(jīng)病理性痛等不同類(lèi)型的疼痛中發(fā)揮重要作用。但是這

2、些實(shí)驗(yàn)均以成年動(dòng)物為模型,很少涉及到幼年動(dòng)物模型,而兒童的疼痛也比較常見(jiàn),且神經(jīng)系統(tǒng)在發(fā)育過(guò)程中可塑性較強(qiáng),發(fā)育過(guò)程中的刺激可能會(huì)引起神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能改變,因此本實(shí)驗(yàn)采用大鼠生后發(fā)育過(guò)程中的角叉菜膠致炎性痛和坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷(Chronic constriction injury,CCI)術(shù)后神經(jīng)病理性痛模型研究P2X3受體在疼痛中的作用。
　　 方法:
　　 1.通過(guò)大鼠足底皮下注射角叉菜膠致炎建立急性炎性痛模

3、型:通過(guò)大鼠坐骨神經(jīng)CCI術(shù)建立神經(jīng)病理性痛模型。
　　 2.通過(guò)觀(guān)察模型大鼠的行為學(xué)變化,并測(cè)定動(dòng)物的熱痛閾(Thermal withdrawllatency,TWL)和機(jī)械性痛閾(Paw withdrawl threshold,PWT)研究疼痛的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。
　　 3.通過(guò)免疫組織化學(xué)技術(shù)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)炎性痛和神經(jīng)病理性痛模型大鼠的背根神經(jīng)節(jié)(Dorsal root ganglion,DRG)和脊髓背角的P2X3受體的

4、表達(dá)變化特點(diǎn),并進(jìn)行半定量分析。
　　 結(jié)果:
　　 第一部分:
　　 1.成功建立了大鼠不同發(fā)育階段角叉菜膠致炎性痛模型,足底皮下注射角叉菜膠后出現(xiàn)舔足、縮足等痛覺(jué)相關(guān)行為。
　　 2.發(fā)育過(guò)程中正常大鼠的痛閾逐漸升高。新生大鼠與成年大鼠足底皮下注射交叉菜膠后的痛閾變化趨勢(shì)相似,均出現(xiàn)熱痛敏和機(jī)械性痛敏現(xiàn)象,痛閾先降低,注射后6-12h達(dá)最低點(diǎn),再逐漸恢復(fù),注射后7d大多數(shù)恢復(fù)至正常水平。
　　

5、 3.大鼠正常發(fā)育過(guò)程DRG中P2X3受體表達(dá)逐漸下調(diào)。新生7天、14天和21天的幼年大鼠足底皮下注射角叉菜膠后,P2XB受體在DRG中的表達(dá)下調(diào),而且下降速度快于正常發(fā)育過(guò)程中的下降速度。成年大鼠足底皮下注射角叉菜膠致炎后DRG中P2Xs受體表達(dá)逐漸升高,注射后1d達(dá)到最高,而后逐漸下降,注射后7d接近正常水平。新生7天的大鼠脊髓背角P2X3受體在炎性痛過(guò)程中變化不明顯;而成年大鼠足底皮下注射角叉菜膠致炎后脊髓背角中P2Xs受體表達(dá)逐

6、漸升高,注射后1d達(dá)到最高,而后逐漸下降,注射后7d接近正常水平。
　　 第二部分:
　　 1.成功建立了大鼠不同發(fā)育階段坐骨神經(jīng)CCI術(shù)后致神經(jīng)病理性痛的模型,動(dòng)物出現(xiàn)典型的神經(jīng)病理性痛覺(jué)相關(guān)行為。
　　 2.發(fā)育過(guò)程中正常大鼠的痛閾逐漸升高。新生大鼠與成年大鼠CCI術(shù)后的痛閾變化趨勢(shì)相似,均出現(xiàn)痛敏現(xiàn)象,熱痛閾和機(jī)械性痛閾先降低,術(shù)后14d達(dá)到最低,再逐漸恢復(fù),至術(shù)后28d接近正常水平。
　　 3.大

7、鼠正常發(fā)育過(guò)程中DRG中P2X3受體表達(dá)逐漸下調(diào)。新生7天、14天和21天組的大鼠坐骨神經(jīng)CCI術(shù)后能引起術(shù)側(cè)的P2X3受體在DRG中的表達(dá)下調(diào),且速度快于正常發(fā)育過(guò)程中的下降速度。成年組大鼠坐骨神經(jīng)CCI后大鼠DRG中P2X3受體表達(dá)逐漸升高,術(shù)后14d達(dá)到最高,而后逐漸下降,術(shù)后28d接近正常水平。新生7天的大鼠脊髓背角P2Xs受體表達(dá)變化不明顯;而成年組大鼠坐骨神經(jīng)CCI后大鼠脊髓背角中P2X3受體表達(dá)逐漸升高,術(shù)后14d達(dá)到最高

8、,而后逐漸下降,術(shù)后28d接近正常水平。
　　 結(jié)論:
　　 1.新生大鼠的神經(jīng)系統(tǒng)生后正常發(fā)育成熟過(guò)程中痛閾逐漸升高。皮下注射角叉菜膠后能引起新生和成年大鼠的急性炎性痛,動(dòng)物均出現(xiàn)痛閾迅速下降再逐漸恢復(fù)至正常的趨勢(shì);坐骨神經(jīng)CCI術(shù)后能引起新生和成年大鼠的神經(jīng)病理性痛,動(dòng)物均出現(xiàn)痛閾下降再緩慢恢復(fù)至正常的趨勢(shì)。與神經(jīng)病理性痛相比較,炎性痛發(fā)病快,持續(xù)時(shí)間短,恢復(fù)快。
　　 2.P2X3受體在大鼠生后神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)

9、育成熟中發(fā)揮重要作用,而且新生大鼠的神經(jīng)系統(tǒng)具有易損性,新生大鼠受到炎性痛和神經(jīng)病理性痛刺激后,DRG中P2X3受體表達(dá)下降。
　　 4.P2X3受體在成年大鼠的炎性痛和神經(jīng)病理性痛過(guò)程中發(fā)揮重要作用,成年大鼠受到炎性痛和神經(jīng)病理性痛刺激后,DRG和脊髓背角P2X3受體的表達(dá)增加。
　　 綜上所述,P2X3受體在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育成熟中發(fā)揮作用,并且在炎性痛和神經(jīng)病理性痛過(guò)程中發(fā)揮重要作用。但是疼痛涉及的細(xì)胞、受體及通道比較