骨髓間質(zhì)充質(zhì)干細(xì)胞治療急性肝衰的旁分泌作用的研究.pdf

1、前言:
　　 在正常成人及成年哺乳動物體內(nèi)肝細(xì)胞是一種穩(wěn)定細(xì)胞,很少見到核分裂現(xiàn)象,而當(dāng)肝臟受到損傷時,肝細(xì)胞會從低分化狀態(tài)中迅速改變,手術(shù)切除造成的肝損傷是引起肝再生的一種方法。肝細(xì)胞生長因子(Hepatocyte Growth Factor,HGF)是一個多效應(yīng)生長因子,參與機體多種器官組織細(xì)胞尤其是肝細(xì)胞的生長、再生和重塑等過程。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)肝部分切除后應(yīng)用肝細(xì)胞生長因子與單純肝部分切除相比,肝再生指數(shù)和殘留肝臟質(zhì)量明顯升高

2、,因此HGF能促進(jìn)肝臟再生[1]。間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的多種細(xì)胞因子HGF,VEGF,bFGF等作用于周圍細(xì)胞發(fā)揮旁分泌作用,參與移植治療后的免疫調(diào)節(jié),調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng),可以抑制功能細(xì)胞的凋亡,促進(jìn)前體細(xì)胞的分化和增殖,并參與新生血管,改善損傷組織的微循環(huán),發(fā)揮重要的病理生理作用[2]。體外干細(xì)胞與肝細(xì)胞共培養(yǎng)的實驗證明:問充質(zhì)干細(xì)胞的旁分泌物質(zhì)在體外可以刺激正常肝細(xì)胞再生,抑制受損肝細(xì)胞凋亡[3].BMSCs在經(jīng)門靜脈移植后干細(xì)胞在肝大部切除

3、大鼠體內(nèi)的HGF表達(dá)情況目前尚未見報道。本研究將BMSCs經(jīng)門靜脈移植入85%肝切除的大鼠體內(nèi)。觀察肝組織內(nèi)HGF表達(dá)情況,動態(tài)觀察其肝功的變化情況及肝細(xì)胞再生情況,進(jìn)一步為BMSCs治療急性肝衰提供實驗依據(jù)。
　　 實驗方法:
　　 建立大鼠肝大部切除(依次切除肝臟中葉,左上葉,左下葉以及尾狀葉,保留肝右葉)術(shù)后急性肝衰模型,將同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BoneMesenchymalStemCells,BMSCs)經(jīng)門

4、靜脈注入大鼠體內(nèi),于術(shù)后第1,4,7,14天將大鼠處死,切取肝臟組織,觀察肝臟組織學(xué)的變化情況及肝功能變化情況。應(yīng)用免疫組織化學(xué),Real-TimePCR以及WesternBlot方法檢測肝細(xì)胞生長因子(HGF)的在受體大鼠肝組織中的表達(dá)情況,檢測實驗組與對照組丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)和血漿白蛋白(ALB)等指標(biāo)的差異性是否具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 實驗結(jié)果:
　　 1、大鼠肝功能改變情況<

5、br>　　 實驗組與對照組的大鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)和血漿白蛋白(ALB)等指標(biāo)相比各時間點均有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 2、肝再生情況
　　 肝組織再生更為明顯,且實驗組肝組織中HGF表達(dá)量明顯高于對照組。
　　 3、肝細(xì)胞生長因子的表達(dá)情況
　　 HGF在第4d和7d的蛋白表達(dá)水平與其他時間有顯著差異,且與對照組相比較,HGF表達(dá)水平更高,4d的表達(dá)水平最高,差異具有統(tǒng)

6、計學(xué)意義(P＜0.05)。RealtimePCR結(jié)果顯示:HGF在4d和7dmRNA表達(dá)水平較對照組升高,差異具有顯著性(P＜0.05)。對照組與假手術(shù)組相比差異顯著(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植可以促進(jìn)肝大部切除術(shù)造成的急性肝衰的術(shù)后恢復(fù),實驗組肝組織中HGF的表達(dá)量明顯高于對照組。BMSCs移植可改善受損肝臟功能,促進(jìn)肝細(xì)胞增殖,提高大鼠的生存率,促進(jìn)肝組織再生。本實驗研究結(jié)果初步揭示了