腸道缺血再灌注損傷對骨髓間充質(zhì)干細胞旁分泌作用的影響.pdf

1、腸道的缺血再灌注損傷在臨床當中日益得到重視。目前認為，在氧自由基、中性粒細胞、炎癥因子、補體等多種因素的的共同作用下，腸道成為在缺血再灌注損傷中極易受到傷害的器官。嚴重的腸道的損傷可導(dǎo)致導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征（MIRS）和多器官功能不全綜合征（MODS）。而對于腸道缺血再灌注損傷的治療，目前仍然缺乏有效的治療手段。
　　 骨髓來源的間充質(zhì)干細胞（bone marrow-derived mesenchymAlstem cells，

2、BM-MSCs）
　　 是一種存在于骨髓內(nèi)的具有多向分化潛能的成體干細胞。由于BM-MSCs 具有易于獲得、多向分化、高度增殖的特點，成為近年來器官損傷修復(fù)的重要手段。在動物試驗已經(jīng)證實同種異體BM-MSCs 移植可定植于胃腸道，并參與腸道損傷的修復(fù)。對于BM-MSCs參與受損組織修復(fù)的具體的機制，目前認為有直接分化和旁分泌兩種方式，但仍缺乏進一步的研究證實。本研究試圖模擬腸道缺血再灌注損傷的病理生理環(huán)境，觀察腸道的缺血再灌注刺

3、激對BM-MSCs 旁分泌的影響，以證實BM-MSCs在腸道修復(fù)中的旁分泌作用。
　　 研究目的
　　 1、完成Wistar 雄性大鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞分離、培養(yǎng)、鑒定、染色工作。
　　 2、探討并制備腸道缺血再灌注大鼠模型，證實其腸道損傷及功能障礙，為后續(xù)的治療和檢測奠定基礎(chǔ)。
　　 3、觀察腸道的缺血再灌注損傷刺激對BM-MSCs 旁分泌作用的影響，以證實BM-MSCs在腸道修復(fù)中的旁分泌作用。

4、>　　 研究方法
　　 1、分離、培養(yǎng)、鑒定、染色Wistar 雄性大鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞。
　　 2、用腸系膜上動脈夾閉的方式制備大鼠腸道缺血再灌注模型，并根據(jù)夾閉時間的不同分為20分鐘組，30分鐘組，40分鐘組和50分鐘組，并檢測損傷后腸道的LPS和腸道損傷指數(shù)，以尋找最合適的夾閉時間。
　　 3、分別提取腸道缺血再灌注模型大鼠、正常大鼠的腸上皮粘膜提取物，與BM-MSCs共同培養(yǎng)；
　　 4、分別

5、在培養(yǎng)的第0天、第1天、第3天和第5天留取條件培養(yǎng)基，ELISA 檢測不同細胞條件培養(yǎng)基以及普通培養(yǎng)基中TGF-α、VEGF、 FGF、IGF-1的含量。
　　 結(jié)果
　　 1、全骨髓培養(yǎng)法得到的貼壁細胞完全符合骨髓間充質(zhì)干細胞的特性，經(jīng)鑒定為BM-MSCs；
　　 2、在制備大鼠腸道缺血再灌注模型的過程中，夾閉40分鐘組和夾閉50分鐘組死亡率過高，而夾閉20分鐘腸道損傷程度不能達標，只有夾閉30分鐘既可以控制死

6、亡率又能夠保證損傷達標；
　　 3、四種生長因子在含有腸上皮提取物的條件培養(yǎng)基中的含量均明顯高于普通培養(yǎng)基。其中含有缺血再灌注腸上皮提取物的培養(yǎng)基TGF-α、VEGF、 FGF的含量明顯高于含有正常腸上皮提取物的培養(yǎng)基。VEGF 含量的高峰時間出現(xiàn)在第三天，而FGF、IGF-1含量的高峰時間出現(xiàn)在第五天，TGF-α含量在第1-5天未見到明顯差異。
　　 結(jié)論
　　 1、全骨髓培養(yǎng)法是簡便、可靠的BM-MSCs 培