立體定向注射魚藤酮制備帕金森病大鼠模型的研究.pdf

1、目的：探討單側(cè)雙靶點(diǎn)立體定向注射魚藤酮(rotenone)制備帕金森病大鼠模型的方法，并對(duì)模型的行為學(xué)和形態(tài)學(xué)進(jìn)行觀察評(píng)價(jià)。 方法：采用成年雌性Sprague-Dawley大鼠28只，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組18只，對(duì)照組10只，應(yīng)用大鼠立體定向儀將魚藤酮用微量注射器注射于大鼠腦右側(cè)黑質(zhì)致密部(SNc)及中腦腹側(cè)被蓋區(qū)(VTA)，注射點(diǎn)坐標(biāo)參照包新民立體定向圖譜。魚藤酮濃度為4μg/μl，溶解于二甲基亞砜中，每點(diǎn)注射2μl，對(duì)照組大鼠每點(diǎn)

2、注射二甲基亞砜2μl。于手術(shù)后第1、2、3周分別觀察大鼠由阿樸嗎啡(APO)誘導(dǎo)的旋轉(zhuǎn)行為，并于第2周和第3周行為學(xué)檢測結(jié)束后第2天分兩批處死大鼠，灌注取腦，分離中腦石蠟包埋，連續(xù)冠狀切片，片厚為5μm，采用免疫組織化學(xué)染色方法觀察中腦黑質(zhì)酪氨酸羥化酶(TH)陽性神經(jīng)元的改變。 結(jié)果： 1.實(shí)驗(yàn)組大鼠死亡2只，共16只大鼠進(jìn)入結(jié)果分析。至第2周共有13只大鼠阿樸嗎啡誘導(dǎo)出偏側(cè)旋轉(zhuǎn)，占實(shí)驗(yàn)組總數(shù)的81.25％，而對(duì)照組均未

3、誘導(dǎo)出旋轉(zhuǎn)，二者差異明顯。 2.第1周時(shí)，大鼠誘導(dǎo)后每分鐘最高轉(zhuǎn)速為17圈，最低為不足1圈，平均4.4±4.3圈/分鐘，30分鐘旋轉(zhuǎn)圈數(shù)平均為106±103；第2周時(shí)數(shù)據(jù)為平均6.4±5.2圈/分鐘，152±112圈/30分鐘。兩組均數(shù)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 3.第2周處死5只模型組大鼠，其余8只大鼠3周旋轉(zhuǎn)數(shù)據(jù)分別為每分鐘4.8±5.2、7.9±6.2、8.0±5.9圈，30分鐘內(nèi)旋轉(zhuǎn)分別為111±127、180±128、

4、189±126圈，分別進(jìn)行組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 4.第1、2、3周大鼠旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)的啟動(dòng)時(shí)間分別為8.4±5.1、9.5±6.3、6.5±3.6分鐘。3組時(shí)間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。持續(xù)時(shí)間分別為36.5±9.1、38.5±8.6、45.0±6.3分鐘。3組時(shí)間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 5.光鏡下計(jì)數(shù)可見模型組大鼠右側(cè)(魚藤酮注射側(cè))中腦黑質(zhì)TH陽性神經(jīng)元數(shù)目平均為37.3±22.4個(gè)，而左側(cè)平均神經(jīng)元數(shù)為78.3±21.9個(gè)，右側(cè)較

5、左側(cè)明顯減少。而對(duì)照組大鼠黑質(zhì)平均神經(jīng)元數(shù)右側(cè)為58.9±18.3個(gè)，左側(cè)為64.5±16.5個(gè)，兩側(cè)比較統(tǒng)計(jì)學(xué)無差異。模型組大鼠與對(duì)照組大鼠右側(cè)TH陽性神經(jīng)元數(shù)比較，模型組較對(duì)照組明顯減少。模型組大鼠第2周時(shí)右側(cè)平均神經(jīng)元數(shù)為32.4±19.2個(gè)，第3周時(shí)右側(cè)神經(jīng)元數(shù)為44.6±25.8個(gè)，兩時(shí)間點(diǎn)比較統(tǒng)計(jì)學(xué)無差異。 6.部分切片細(xì)胞較對(duì)側(cè)數(shù)目減少趨勢不明顯，但可在該側(cè)發(fā)現(xiàn)免疫組化染色呈現(xiàn)出明顯淡染。在高倍鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)可見