富馬酸亞鐵葉酸分散片的臨床前研究.pdf

1、貧血是世界范圍內(nèi)常見的疾病之一。據(jù)WHO最新資料統(tǒng)計(jì)，全世界貧血人數(shù)約有30億，其中育齡婦女約占10％-20％。此外，孕婦一旦發(fā)生貧血，在妊娠和分娩時(shí)死亡的危險(xiǎn)性將增加5倍，同時(shí)發(fā)生早產(chǎn)、胎兒畸形和體重偏低的可能性也會(huì)升高。因此，貧血已成為全球關(guān)注的公共衛(wèi)生問題。本文研究的富馬酸亞鐵葉酸分散片是一種抗貧血藥物新制劑，屬國家3.2類新藥，其中亞鐵與葉酸的比例(150:1)為WHO最新推薦的補(bǔ)充亞鐵與葉酸的最佳比例。迄今為止，國內(nèi)外未見該比

2、例的亞鐵與葉酸組合及其分散片的研究報(bào)道和相關(guān)產(chǎn)品上市，僅見本課題組申請(qǐng)并公開的“富馬酸亞鐵葉酸分散片及其制備方法”發(fā)明專利(CN101669954)。作者按照2007年國家食品藥品監(jiān)督管理局第28號(hào)令《藥品注冊(cè)管理辦法》中“化學(xué)藥品注冊(cè)分類及申報(bào)資料要求”，對(duì)其進(jìn)行了臨床前的處方工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、急性毒性、一般藥理學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)與生物利用度等研究，旨在為富馬酸亞鐵葉酸分散片的臨床試驗(yàn)和新藥注冊(cè)積累資料。
　　 第一部分，富馬酸亞鐵

3、葉酸分散片處方工藝研究。通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，以崩解時(shí)限、分散均勻性、脆碎度為指標(biāo)，對(duì)富馬酸亞鐵葉酸分散片的輔料種類和用量進(jìn)行了篩選。結(jié)果最優(yōu)處方為：富馬酸亞鐵和葉酸共占54％(亞鐵：葉酸=150:1)，填充劑微晶纖維素占30％，崩解劑聚乙烯吡咯烷酮占8％，表面活性劑十二烷基硫酸鈉占1.5％，粘合劑PVP-K30占4％，助流劑微粉硅膠占1％，潤滑劑硬脂酸鎂占0.5％，矯味劑甜菊素占1％。采用濕法制粒壓片工藝制備分散片，具有工藝簡單、

4、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
　　 第二部分，富馬酸亞鐵葉酸分散片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。HPLC法測(cè)定富馬酸亞鐵葉酸分散片中葉酸含量、有關(guān)物質(zhì)及溶出度，硫酸鈰滴定法測(cè)定富馬酸亞鐵含量。HPLC法色譜條件：色譜柱為島津Shim-pack VP-ODS(250mm×4.6mm)，流動(dòng)相為CH3OH：KH2PO4緩沖液(pH：6.3)=20:80，流速為1mL/min，檢測(cè)波長為277 nm，進(jìn)樣量為20μL。在此條件下，葉酸與各雜質(zhì)峰

5、分離良好，理論塔板數(shù)按葉酸峰計(jì)算不低于3000，分離度大于1.5。該方法高效、簡單、專屬性強(qiáng)，其靈敏度、回收率和重現(xiàn)性均較好。性狀為棕黃色圓形片劑；鑒別反應(yīng)靈敏；富馬酸亞鐵和葉酸的含量分別為標(biāo)示量的99.13％和99.24％，葉酸的有關(guān)物質(zhì)含量小于1％，高鐵鹽含量小于5％；15分鐘累積溶出率達(dá)80％以上且溶出均勻，含量均勻度和分散均勻性檢查均符合要求。參照新藥指導(dǎo)原則以及2005版《中國藥典》二部附錄要求，最終擬定了富馬酸亞鐵葉酸分散片

6、的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案。
　　 第三部分，富馬酸亞鐵葉酸分散片急性毒性試驗(yàn)。采用改良寇氏法測(cè)定了該分散片的LD50。首先通過預(yù)試獲得0％與100％小鼠死亡的劑量范圍，分別為912mg/kg、3832mg/kg；再以各劑量組間的公比為r=1.25進(jìn)行正式試驗(yàn)，給藥后即刻觀察動(dòng)物反應(yīng)情況，并定時(shí)觀察7天，記錄給藥后的毒性癥狀及死亡情況，按改良寇氏法公式計(jì)算LD50和95％可信限。結(jié)果，富馬酸亞鐵葉酸分散片的LD50和95％可信限分別為213

7、7.5mg/kg、1972.3～2316.5mg/kg，其LD50值相當(dāng)于成人口服該藥劑量的712.5倍，顯示該分散片的毒性極小。
　　 第四部分，富馬酸亞鐵葉酸分散片一般藥理學(xué)研究。以富馬酸亞鐵葉酸分散片LD50的1/20、1/10、1/5作為低、中、高三種給藥劑量，測(cè)定其對(duì)小鼠自主活動(dòng)、協(xié)調(diào)功能、戊巴比妥鈉閾下劑量及閾劑量催眠作用以及對(duì)大鼠血壓、心率和呼吸頻率等的影響。結(jié)果，富馬酸亞鐵葉酸分散片低、中、高三種劑量對(duì)小鼠的自主

8、活動(dòng)、協(xié)調(diào)功能未見明顯影響，對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量、閾劑量的催眠作用未見協(xié)同作用；對(duì)大鼠血壓、心率和呼吸頻率均未見明顯影響。
　　 第五部分，富馬酸亞鐵葉酸分散片藥代動(dòng)力學(xué)與生物利用度研究。采用原子吸收分光光度法測(cè)定血漿鐵濃度，運(yùn)用WinNonlin5.2.1藥代動(dòng)力學(xué)軟件處理血藥濃度數(shù)據(jù)。以家兔為模型動(dòng)物，自制的富馬酸亞鐵葉酸普通片為參比制劑，設(shè)計(jì)二制劑二周期交叉試驗(yàn)，考察富馬酸亞鐵葉酸分散片在家兔體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征，并比較其

9、分散片與普通片的相對(duì)生物利用度。結(jié)果，富馬酸亞鐵葉酸分散片的Cmax為(10.36±0.64)μg/mL，Tmax為(0.79±0.10)min，AUC(121.15±10.26)μg/mL·h；富馬酸亞鐵葉酸普通片的Cmax為(8.95±0.48)μg/mL，Tmax為(1.33±0.52)min，AUC為(110.21±15.56)μg/mL·h；富馬酸亞鐵葉酸分散片的相對(duì)生物利用度為108.56％。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，富馬酸亞鐵葉酸分散片