GABAB受體變構(gòu)調(diào)節(jié)劑CGP7930構(gòu)效關(guān)系的研究.pdf

1、γ-氨基丁酸(γ-gamma aminobutyric acid,GABA)是最為重要的神經(jīng)遞質(zhì),主要在脊椎動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮抑制性作用,調(diào)節(jié)許多重要的生理進程。代謝型γ-氨基丁酸受體GABAB受體與代謝型谷氨酸受體、鈣敏感受體、信息素受體和味覺受體等同屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族C,介導(dǎo)緩慢的、長時間的突觸抑制效應(yīng)。GABAB受體是最具有藥理學(xué)意義的藥物靶點之一,具有精細和復(fù)雜的調(diào)控機制,過度抑制和激活都會導(dǎo)致各種疾病的發(fā)生。GABAB

2、受體傳統(tǒng)的靶點藥物開發(fā)集中于激動劑和拮抗劑,然而這類藥物在臨床應(yīng)用上受到許多的限制,如機體藥物代謝困難、較強的副作用、耐藥性差等等。變構(gòu)調(diào)節(jié)劑結(jié)合于天然配體結(jié)合位點之外,能夠調(diào)節(jié)異源二聚體亞基或結(jié)構(gòu)域間的相互作用,并具有較高的特異性和藥物安全性,同時還能夠保持GABAB受體信號在時間和空間上的可控性。因此變構(gòu)調(diào)節(jié)劑為GABAB受體靶點藥物開發(fā)提供了新思路。
　　本文主要針對GABAB受體變構(gòu)調(diào)節(jié)劑小分子化合物的高通量篩選和作用分子

3、機制的研究。目前針對GABAB受體的變構(gòu)調(diào)節(jié)劑的研究尚僅僅集中于CGP7930(2001)、GS39783(2003)、BHF177(2008)、CMPPE(2011)四種正向變構(gòu)調(diào)節(jié)劑,而且負向變構(gòu)調(diào)節(jié)劑還未見報道。通過與上海國家新藥篩選中心(NCDS)的合作,由新藥篩選中心運用組合化學(xué)的方法以CGP7930為母核改造并合成了多種小分子化合物。我們通過放射性IP3功能檢測技術(shù)對小分子化合物進行藥物篩選,并構(gòu)建CGP7930構(gòu)效關(guān)系圖譜

4、。
　　我們使用工具細胞人胚腎細胞HEK293,進行電穿孔轉(zhuǎn)染GB1、GB2及Gqi9質(zhì)粒,孵育[3H]myo-inositol后,50μM藥物與不同濃度GABA同時刺激細胞,用50μMCGP7930與不同濃度GABA同時刺激細胞作為正對照,不同濃度的GABA單獨刺激作為負對照,然后進行放射性IP3功能檢測。從合成的小分子化合物庫中挑選15種在結(jié)構(gòu)上具有代表性和規(guī)律性的小分子化合物,15種小分子化合物分別在R1、R2、R3、R4、

5、R5共5個基團位置進行改造。根據(jù)改造后的小分子化合物放射性IP3功能檢測的結(jié)果,分別總結(jié)出了R1-R5不同基團位置的作用,并成功構(gòu)建出了CGP7930構(gòu)效關(guān)系圖譜。并推測R1基團位置的羥基和R2基團位置的兩個叔丁基支鏈是CGP7930識別GB2亞基位點所必需的;在CGP7930三維結(jié)構(gòu)中,R5基團位置碳原子所連接的基團對CGP7930的變構(gòu)調(diào)節(jié)活性有關(guān)鍵的影響,改變該位置結(jié)構(gòu)可能會使CGP7930的特性發(fā)生改變,從而篩選獲得更加高效和不