版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、近年來,HIV病毒在全球范圍內呈現(xiàn)快速流行態(tài)勢。HIV抗體診斷試劑作為目前初步診斷HIV的主要方法,具有巨大的市場價值。隨著生物技術的發(fā)展,利用基因工程的手段,制備具有良好免疫反應性的HIV-1 gp41重組抗原原料,對于HIV抗體診斷試劑的研發(fā)有著深遠意義。
本文首先合成了經(jīng)過密碼子優(yōu)化的gp41基因質粒模板pET-28a(+)-gp41,PCR擴增獲得了包含gp41主要優(yōu)勢抗原表位以及膜外重要結構域(NHR、CHR、MPE
2、R)的截短基因序列。通過在gp41截短片段上游添加親水性分子伴侶DsbA,在大腸桿菌體內實現(xiàn)了gp41優(yōu)勢抗原表位蛋白的融合表達。在優(yōu)化表達條件下(37℃,0.2 mM IPTG,誘導后培養(yǎng)時間10h),融合蛋白表達水平為8.7μg/mL。
鑒于gp41融合蛋白在大腸桿菌體內表達的水平較低,無法滿足制備gp41抗原的要求,本研究進而利用大腸桿菌體外無細胞體系表達gp41蛋白。利用PCR克隆gp41全長基因,成功構建無細胞表達重
3、組質粒pIVEX2.4c-gp41,在大腸桿菌無細胞體系中實現(xiàn)了gp41全長蛋白的表達。進一步考察去污劑重懸目標蛋白和直接在無細胞體系中添加去污劑兩種模式對獲得可溶gp41蛋白的影響。結果顯示,所嘗試的各種去污劑均不能有效重懸gp41蛋白沉淀;而直接添加去污劑模式在最優(yōu)條件下(添加終濃度為0.2%的Brij78),可溶gp41蛋白的表達水平達到650μg/mL。
對添加去污劑模式所表達的可溶gp41重組蛋白進行純化、濃縮和替換
4、緩沖液,蛋白純度達到95.6%,濃度為1.5 mg/mL,總回收率為70%。利用純化后的gp41重組蛋白制備乳膠法免疫層析試紙,通過對不同抗體滴度HIV-1陽性標本、HIV-1陰性標本、TP陽性標本以及HBeAb陽性標本的檢測,證明該gp41重組蛋白免疫反應性良好。
總之,本文致力于HIV-1 gp41在大腸桿菌體內和體外無細胞體系的重組表達研究。通過對無細胞表達體系的優(yōu)化,實現(xiàn)了gp41的全長可溶表達,親和純化獲得的目標蛋白
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- HIV-1跨膜蛋白gp41在大腸桿菌中的表達及純化.pdf
- HIV-1 gp41第二優(yōu)勢表位簇在大腸桿菌中的高效表達.pdf
- 高效表達重組HIV-1膜蛋白gp41及其在尿液檢測中的應用.pdf
- 人免疫缺陷病毒gp41基因在大腸桿菌中的表達.pdf
- HIV-1主要抗原蛋白在畢赤酵母和大腸桿菌中的重組表達.pdf
- HIV-1融合蛋白gp41的結構和功能研究.pdf
- HIV-GP41蛋白在大腸桿菌中表達研究.pdf
- 重組HIV-1包膜糖蛋白gp120和gp41的表達、純化及初步應用.pdf
- HIV-1融合蛋白gp41自然突變及功能研究.pdf
- HIV-1 CRF07-BC gp41和EIAV gp45的結構和功能研究.pdf
- 結合HIV-1 gp41 NHR的環(huán)肽及模擬gp41融合核心結構表位的篩選與鑒定.pdf
- 抗HIV-1 gp41二硫鍵穩(wěn)定單鏈抗體及其重組導向毒素的表達及活性測定.pdf
- HIV-1 CRF07 B’-C gp41 HR2結構特征初探.pdf
- 抗HIV-1 gp41合成多肽gp41-5單克隆抗體的制備、鑒定及初步應用.pdf
- HIV-1包膜糖蛋白gp120s在大腸桿菌中的表達純化和初步應用.pdf
- 體內和體外高效表達大腸桿菌水通道蛋白Z.pdf
- HIV-1 p24和gp41融合基因載體的構建以及融合蛋白在原核細胞中的表達.pdf
- 以HIV-1 gp41與CCR5為靶點的藥物設計研究.pdf
- HIV-1膜抗原改造和免疫策略研究.pdf
- HIV-1囊膜糖蛋白gp41核心結構域基因的表達及其單克隆抗體的制備.pdf
評論
0/150
提交評論