人類外周血免疫細(xì)胞體外培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的建立和個體化差異研究.pdf

1、樹突狀細(xì)胞(Dendritic Cell，DC)和細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(Cytokine Induced Killer cell，CIK)在腫瘤的細(xì)胞免疫治療中扮演了關(guān)鍵角色。DC作為人體最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞(Antigen-Presenting Cell，APC)，以主要組織相容性復(fù)合體(Major Histocompatibility Complex，MHC)分子限制性的方式識別腫瘤抗原，激活淋巴細(xì)胞以殺傷腫瘤;CIK以MHC非限制

2、性的方式直接殺傷腫瘤細(xì)胞。兩種細(xì)胞在人體外周血中十分稀少。利用其前體細(xì)胞在體外培養(yǎng)，誘導(dǎo)分化或擴(kuò)增出足夠數(shù)量且質(zhì)量合格的細(xì)胞，回輸腫瘤患者，是安全、有效地進(jìn)行細(xì)胞免疫治療腫瘤的前提。
　　目的:第一部分:為確保免疫細(xì)胞(DC和CIK)體外采集、分離、培養(yǎng)、凍存等操作規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化，得到符合臨床應(yīng)用級別的細(xì)胞，確保細(xì)胞免疫治療疾病以安全、有效的方式進(jìn)行，本室遵循國內(nèi)外相關(guān)法規(guī)，以及歐盟和中國良好生產(chǎn)規(guī)范(Good Manufactu

3、ring Practice，GMP)的要求，以期建立DC和CIK體外操作的一系列標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(Standard Operating Procedure，SOP)，并初步制定DC和CIK質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。第二部分:分別對1例早期乳腺癌、1例晚期卵巢癌和5例健康成年人的免疫細(xì)胞，在培養(yǎng)前、后的細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞表型和功能進(jìn)行比較，初步探討不同個體間（健康人或腫瘤患者）的免疫細(xì)胞表型和功能的差異，為個體化的細(xì)胞免疫治療腫瘤提供初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　

4、方法:以《人體細(xì)胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》、《自體免疫細(xì)胞治療技術(shù)管理規(guī)范》、《中國藥典》、歐盟GMP、《中國GMP實(shí)施指南》等為指導(dǎo)，針對前體細(xì)胞-外周血單個核細(xì)胞(PeripheralBlood Mononuclear Cell，PBMC)的采集、分離、凍存，DC、CIK培養(yǎng)和擴(kuò)增、表型鑒定和功能檢測等過程，制定SOP;遵循已制定的SOP，對DC和CIK體外培養(yǎng)和檢測等過程進(jìn)行質(zhì)量控制;對1例早期乳腺癌、1例晚期卵巢癌和

5、5例健康人分離得到PBMC、培養(yǎng)擴(kuò)增得到的DC和CIK進(jìn)行免疫相關(guān)參數(shù)的比較。
　　結(jié)果:1、通過本研究，已初步建立一系列DC、CIK體外操作相關(guān)的SOP;遵循這些SOP，對免疫細(xì)胞體外操作過程進(jìn)行了質(zhì)量控制，并初步獲得了DC和CIK細(xì)胞質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。2、我們發(fā)現(xiàn)在自體血漿培養(yǎng)條件下與在胎牛血清和人AB血清條件下培養(yǎng)得到的DC表型和功能相比，并無顯著性差別。3、呈粘附生長狀態(tài)的DC與傳統(tǒng)的非粘附生長的DC相比，其表型和功能也無顯著差別