二苯乙烯苷對老齡大鼠腦缺血再灌注損傷后HIF-1α及EPO蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的:腦缺血再灌注損傷后病灶區(qū)由缺血中心區(qū)及其周圍的缺血半暗區(qū)組成。目前認(rèn)為缺血中心區(qū)的神經(jīng)元死亡形式是壞死,神經(jīng)細(xì)胞的死亡是不可逆的;而缺血半暗區(qū)神經(jīng)元死亡的主要形式是凋亡,在一定條件下,神經(jīng)細(xì)胞的死亡是可逆的,因此缺血性腦損傷的治療關(guān)鍵在于挽救缺血半暗區(qū)瀕臨凋亡的神經(jīng)元。低氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)是在缺氧條件下廣泛存在于哺乳動物及人體的一種轉(zhuǎn)錄因子。近年來,越來越多的證據(jù)顯示,HIF-1α在腦缺血再灌注損傷中具有保護作

2、用,且HIF-1α的這種保護作用主要是通過對其相應(yīng)的靶基因的調(diào)節(jié)而產(chǎn)生的。促紅細(xì)胞生成素(EPO)是受缺氧調(diào)節(jié)的糖蛋白激素,是HIF-1α下游一個靶基因編碼的蛋白,EPO能通過上調(diào)bcl-2、bcl-xl基因表達(dá)、抑制Caspasc-9的表達(dá)、抑制NO過度合成、抗谷氨酸興奮的神經(jīng)毒性、抑制細(xì)胞色素c的釋放等多條途徑發(fā)揮腦保護作用。已有研究顯示,腦缺血耐受可誘導(dǎo)缺血腦組織內(nèi)源性HIF-1α及EPO的表達(dá)增加,減少腦梗死的體積。中藥何首烏(

3、polygonum multiflorum thunb)及其活性成分二苯乙烯苷(簡稱TSG)對腦缺血性損傷具有保護作用,但具體作用機制仍不十分明確。本研究將以二苯乙烯苷為干預(yù)手段,在大鼠腦缺血再灌注損傷模型上,通過觀察大鼠局灶性腦缺血再灌注后缺血周邊區(qū)HIF-1α、EPO及凋亡細(xì)胞的表達(dá)變化,結(jié)合病理、神經(jīng)功能缺損程度等方面,探討該藥在腦缺血再灌注損傷中腦保護作用的可能機制,以期為腦缺血的治療以及新藥的開發(fā)提供實驗基礎(chǔ)。
　　

4、方法:400～500g清潔級健康雄性SD大鼠,鼠齡20個月。分為3組:對照組(n=24),模型組(n=24),TSG組(n=24)。TSG以劑量60mg/kg/d灌胃,給藥體積5ml/kg/d,模型組以相同體積的生理鹽水灌胃,第七天灌胃后1h行Longa線栓法制備大腦中動脈栓塞模型(MCAO)。按Longa的5級標(biāo)準(zhǔn)評分法評價神經(jīng)功能缺損,再灌注6小時、24小時、48小時、7天四個時間點處死大鼠。分別采用HE染色觀察缺血周邊區(qū)病理學(xué)變化

5、:免疫組織化學(xué)法檢測HIF-1α及EPO的表達(dá),原位末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法(TUNEL)檢測神經(jīng)細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)果:
　　 1、TSG組大鼠神經(jīng)功能缺損程度除6小時組外其余時間點均低于模型組。
　　 2、TSG組與模型組再灌注24小時的HE染色均顯示出典型的壞死灶和神經(jīng)元丟失。
　　 3、對照組各時間點檢測到少量HIF-1α及EPO的表達(dá)。模型組與TSG組HIF-1α及EPO的表達(dá)變化趨勢基本一致

6、,HIF-1α在再灌注6小時后表達(dá)增加,24小時達(dá)到高峰,48小時表達(dá)明顯下降,7天少量表達(dá);EPO在再灌注6小時后表達(dá)明顯增加,48小時達(dá)高峰,7天表達(dá)明顯下降。
　　 4、對照組檢測到少量凋亡細(xì)胞;模型組與TSG組再灌注6 h后凋亡細(xì)胞開始增多,與正常組及假手術(shù)組比較差異顯著,24小時達(dá)高峰,48小時、7天仍有表達(dá)。與模型組對比,TSG組減少再灌注各時間點的細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)論:二苯乙烯苷可能通過誘導(dǎo)老齡大鼠腦缺血