EPO對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及IL-1β和ICAM-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　探討促紅細(xì)胞生成素(Erythropoietin,EPO)對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后的保護(hù)作用及對腦內(nèi)白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和細(xì)胞間黏附分子-1( intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表達(dá)的影響。
　　方法:
　　72只健康成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組:正常對照組(正常組)、假手術(shù)組、模型對照組(模型組)、EPO處理組(

2、EPO組),各組18只,分設(shè)3個時間點的亞組,每個亞組6只。采用Longa線栓法[1]制備大鼠腦缺血-再灌注模型, EPO組在缺血同時予以腹腔注射EPO3000u/kg,模型組和假手術(shù)組在插線后即刻予腹腔注射等量生理鹽水,模型組和EPO組在缺血2h后、假手術(shù)組在手術(shù)后2h拔線實行再灌注,分別再灌注6h、24h、48h后采用Longa評分法行神經(jīng)功能評分,隨之處死取腦,正常組在相應(yīng)時間點評分后,不手術(shù)直接處死取腦。腦組織石蠟包埋切片后,行

3、HE染色、Nissl染色以及IL-1β和ICAM-1免疫組化染色,光鏡觀察組織學(xué)變化以及計算缺血側(cè)大腦皮層IL-1β,ICAM-1陽性反應(yīng)細(xì)胞。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行多個樣本均數(shù)比較的配伍設(shè)計雙因素方差分析,以P<0.05為顯著性檢驗水準(zhǔn)。
　　結(jié)果:
　　1神經(jīng)功能缺損評分:正常組和假手術(shù)組均為0分,在6h、24h、48h三個時間點EPO組評分分別為1.67±0.52分、1.83±0.41分、1.50±0

4、.55分,模型組分別為2.17±0.75分、2.50±0.55分、2.67±0.52分, EPO組神經(jīng)功能缺損評分明顯輕于模型組,二者比較有顯著性差異(P<0.001);但各時間點之間的評分無顯著性差異(P>0.05)。
　　2 HE染色:正常組和假手術(shù)組皮層神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)正常,數(shù)量多,排列整齊。模型組皮層神經(jīng)細(xì)胞稀疏,細(xì)胞間隙增大,并可見大量細(xì)胞變性壞死,表現(xiàn)為胞體皺縮,核固縮深染,核仁消失;而EPO組神經(jīng)細(xì)胞存活數(shù)量增多,損傷程

5、度減輕。
　　3 Nissl染色:正常組及假手術(shù)組皮層神經(jīng)細(xì)胞膜呈藍(lán)紫色,胞核呈飽滿的淡藍(lán)色,可見很多紫藍(lán)色的尼氏小體,細(xì)胞排列整齊;模型組尼氏小體溶解消失或很少;EPO組與模型組相比尼氏小體增多。
　　4腦組織中IL-1β的表達(dá):各處理組之間的IL-1β陽性細(xì)胞表達(dá)比較:正常組與假手術(shù)組比無統(tǒng)計學(xué)差異,模型組、EPO組分別與正常組比 P<0.001,模型組、EPO組分別與假手術(shù)組比P<0.001,模型組與EPO組比P<0.

6、001,皆有顯著性差異;模型組的IL-1β陽性細(xì)胞表達(dá)最高, EPO組下降,正常組與假手術(shù)組僅見少數(shù)陽性細(xì)胞表達(dá)。各時間點之間的IL-1β陽性細(xì)胞的表達(dá)比較:24h與6h比較及48h與24h比較P<0.001,皆有顯著性差異,但48h與6h比較P>0.05,無統(tǒng)計學(xué)差異。模型組與EPO組的IL-1β陽性細(xì)胞表達(dá)在6h升高,24h達(dá)到高峰,48h下降。
　　5腦組織中ICAM-1的表達(dá):各處理組之間的ICAM-1陽性細(xì)胞表達(dá)比較:正

7、常組與假手術(shù)組比無統(tǒng)計學(xué)差異,模型組、EPO組與正常組比 P<0.001,模型組、EPO組分別與假手術(shù)組比P<0.001,模型組分別與EPO組比P<0.001,皆有顯著性差異;模型組的ICAM-1陽性細(xì)胞表達(dá)最高, EPO組下降,正常組與假手術(shù)組僅見少數(shù)陽性細(xì)胞表達(dá)。各時間點之間的ICAM-1陽性細(xì)胞的表達(dá)比較:24h與6h比較及48h與24h比較P<0.001,皆有顯著性差異,但48h與6h比較P>0.05,無統(tǒng)計學(xué)差異。模型組與EP

8、O組的ICAM-1陽性細(xì)胞表達(dá)在6h升高,24h達(dá)到高峰,48h下降。
　　6 IL-1β與 ICAM-1的相關(guān)性:經(jīng)直線相關(guān)分析表明,模型組大鼠 IL-1β陽性細(xì)胞數(shù)表達(dá)與ICAM-1陽性細(xì)胞數(shù)表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.936,P<0.001), EPO組大鼠 IL-1β陽性細(xì)胞數(shù)表達(dá)與 ICAM-1陽性細(xì)胞數(shù)表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.945,P<0.001)。
　　結(jié)論:
　　1在腦缺血再灌注損傷模型大鼠中,EPO