神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)大鼠腦缺血再灌注后HIF-1α及HSP70表達(dá)的影響.pdf

1、目的：采用SD大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，觀察再灌注不同時(shí)間點(diǎn)大鼠神經(jīng)功能缺損情況及缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia．inducible factor，HIF-1α)和熱休克蛋白70(heat shock broken 70，HSP70)表達(dá)情況，并探討神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)的腦保護(hù)機(jī)制，為臨床應(yīng)用神經(jīng)生長(zhǎng)因子治療缺血性腦血管疾病的防治提供理論依據(jù)。 方法：健康成年SD大鼠45只(由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，雌雄不限，體重

2、200g．250g，清潔級(jí)，飼養(yǎng)環(huán)境溫度21℃，自由進(jìn)食水。隨機(jī)分為假手術(shù)組(n=5)(第1組)；對(duì)照組(n=30)，按缺血2h再灌注2h、6h、1 2h、24h、48h、72h再分為5組(分別為第2、3、4、5、6、7組)，每組5只；神經(jīng)生長(zhǎng)因子組(5只)(第8組)和生理鹽水對(duì)照組(5只) (第9組)。參照Nagasawa<'[5]>報(bào)告的方法，用10﹪的水合氯醛(0.35毫升/100克腹腔注射)麻醉動(dòng)物，取仰臥位固定在手術(shù)臺(tái)上，行右

3、側(cè)MCAO手術(shù)，頸部正中切口，分離出右側(cè)頸總、頸外和頸內(nèi)動(dòng)脈，結(jié)扎頸外動(dòng)脈分支起始處、頸總動(dòng)脈近心端，在頸總動(dòng)脈分叉切口處剪一小口，把頭端蘸有石蠟的直徑為0.20毫米的高彈力魚(yú)線(xiàn)向頸內(nèi)動(dòng)脈端插入，繼續(xù)向前推進(jìn)直到感覺(jué)有輕微阻力，即約18毫米，提示已到大腦中動(dòng)脈的起始部。2小時(shí)后緩慢拔．出魚(yú)線(xiàn)即可實(shí)施再灌注。動(dòng)物蘇醒后觀察其體態(tài)及行為，以判斷MCAO模型成功。假手術(shù)組插入尼龍線(xiàn)后馬上抽出，余步驟同手術(shù)組。缺血再灌注模型動(dòng)物清醒后，右側(cè)前肢

4、屈曲內(nèi)收者為研究對(duì)象。第8組大鼠于再灌注后5分鐘肌內(nèi)注射N(xiāo)GF(每100克體重NGF500BU/0.1毫升)，第9組以同樣方法注入相同體積的無(wú)菌生理鹽水。分別觀察幾組動(dòng)物的以下指標(biāo)：Zea Long5分制標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分進(jìn)行各組大鼠神經(jīng)功能評(píng)價(jià)；經(jīng)過(guò)免疫組化和HE染色檢測(cè)大鼠腦內(nèi)HIF-1α和HSP70表達(dá)。 結(jié)果：(1)神經(jīng)功能評(píng)分：2-9組分別為2.000±0.7071，2.200±0.4472，2.400±0.5477，2.600

5、±0.5477，2.800±0.4472，3.000±0.0000，1.200±0.4472，2.200±0.4472，其中NGF組(8組)與相應(yīng)的缺血再灌注鹽水(9組)對(duì)照組比較，神經(jīng)功能障礙明顯減輕。(P<0.01)(2)腦缺血再灌注后，大鼠腦內(nèi)HIF-1α的表達(dá)量增多，并于再灌注后2小時(shí)達(dá)高峰，以后逐漸減少。HSP70于24 h組達(dá)高峰，以后減少。(P<0.01)。與缺血再灌注組相比，缺血早期給予NGF(干預(yù))，可使腦內(nèi)HIF-1