小鼠胸腺增齡相關(guān)新分子IH1的功能研究—參與NF-κB細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo).pdf

1、IH1是本課題組在小鼠胸腺中發(fā)現(xiàn)的新分子，它隨胸腺增齡表達(dá)降低，生物信息學(xué)和初步實(shí)驗(yàn)研究顯示，它在雄激素受體、NF-kB等信號通路當(dāng)中可以發(fā)揮一定作用。NF-κB介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)是最重要的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一，它在細(xì)胞增殖和凋亡、免疫應(yīng)答、腫瘤發(fā)生、心血管疾病和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中均起著重要作用。而在某些疾病如癌癥、風(fēng)濕性疾病、慢性炎癥、哮喘、神經(jīng)退行性疾病和心臟病中，NF-κB信號通路處于持續(xù)活化的狀態(tài)。我們的研究旨在探索IH1與NF-κB細(xì)

2、胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)系及其可能機(jī)制，具體工作如下： 以EIA細(xì)胞為模型，對IH1基因進(jìn)行過表達(dá)和RNA干擾，用IL-1β刺激細(xì)胞，在不同時(shí)間點(diǎn)觀察NF-κB活化以及信號分子Ir-Ba蛋白水平及磷酸化水平的變化。結(jié)果顯示，無論對IH1進(jìn)行過表達(dá)或干擾，都可以增強(qiáng)NF-κB的活化，增加IκBa分子的磷酸化。 為闡明其機(jī)制，我們首先對IH1蛋白的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析和預(yù)測，該分子N端含一個(gè)RWD結(jié)構(gòu)域，C端則可能大部分處于未折疊狀態(tài)，而很

3、多這種未折疊蛋白在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)或蛋白質(zhì)相互作用中發(fā)揮了重要作用，這提示其功能可能在于與其它分子相互作用。已知RWD結(jié)構(gòu)域與泛素類結(jié)合酶E2在結(jié)構(gòu)上同源，并且一個(gè)含該結(jié)構(gòu)域的分子可以與Ubc9結(jié)合，RWD結(jié)構(gòu)域發(fā)揮了不可替代的作用；另外，人類IH1同源基因編碼的蛋白可以和Drg1或Drg2分子相互作用。因此，我們構(gòu)建了Ubc9、Ube12、Ubc13、Drg1和Drg2幾個(gè)分子的真核表達(dá)載體，用激光掃描共聚焦顯微鏡對細(xì)胞內(nèi)IH1與上述幾個(gè)分子

4、的共定位進(jìn)行研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，IH1分子主要分布于胞漿中，能與幾個(gè)分子共同定位；隨后用免疫共沉淀技術(shù)研究了它們之間的相互作用，發(fā)現(xiàn)IH1可以與Drg1和Drg2發(fā)生相互作用，而未能觀察到IH1與其它分子的相互作用。 綜上所述，我們認(rèn)為IH1分子參與了NF-κB細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，但其機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。另一方面，它還可能通過與Drg1或Drg2分子相互作用，在細(xì)胞生長和個(gè)體發(fā)育的過程中起到一定作用，由此可見，IH1的表達(dá)下降可能影響到胸