鑒別PRRS野毒株與TJM-F92疫苗株間接ELISA方法的建立與初步應用.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是引起母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道癥狀并造成免疫抑制的病毒性傳染病，尤其是在2006年高致病性豬繁殖與呼吸綜合征(highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome, HP-PRRS)大范圍爆發(fā)和流行，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的損失。目前我國主要依靠

2、接種疫苗和執(zhí)行嚴格生物安全措施進行PRRS的防控，而中長期防治PRRS需進一步的凈化豬群。
　　高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒TJM-F92疫苗株（HP-PRRSV TJM-F92）是HP-PRRSV TJ株在細胞上連續(xù)傳代至92代所得弱毒疫苗株。TJM-F92的非結構蛋白2（non-structural protein2， Nsp2）存在一段連續(xù)的120個氨基酸缺失。本研究利用表達TJM-F92疫苗株Nsp2蛋白上連續(xù)缺失的12

3、0個氨基酸的原核表達質粒GST-Nsp2-d120表達蛋白GST-d120，并將純化的GST-d120蛋白作為包被抗原，建立并優(yōu)化了鑒別診斷PRRSV野毒感染和弱毒活疫苗TJM-F92免疫動物的間接酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法，命名為d120-ELISA。建立d120-ELISA后，采用受試者工作曲線方法對270份血清的OD值進行分析，確定d120-ELISA的

4、陰陽性臨界S/P值為0.25。當S/P值為0.25時，d120-ELISA的敏感性為90.7％，特異性為95.1%；d120-ELISA檢測其他常見豬病陽性血清的結果表明其具有 PRRS特異性；重復性試驗結果顯示變異系數(shù)在0.77~17.02%；以上結果表明d120-ELISA具有良好的特異性、敏感性、重復性。與商品化試劑盒對比結果顯示，檢測野毒感染或其他弱毒活疫苗免疫陽性血清的符合率為90.7%，檢測PRRSV陰性血清的符合率為92.

5、2%，商品化試劑盒檢測為陽性的TJM-F92或滅活疫苗免疫血清，d120-ELISA檢測全為陰性，表明 d120-ELISA能夠區(qū)分 PRRSV野毒感染與弱毒活疫苗TJM-F92免疫動物。
　　為進一步驗證鑒別d120-ELISA方法能夠區(qū)分野毒感染與弱毒活疫苗 TJM-F92免疫動物，本研究通過采集10頭試驗動物210份血清進行血清動力學試驗，同時采集具有明確免疫背景的150份臨床血清進行鑒別d120-ELISA方法的臨床初步應

6、用。血清動力學試驗和臨床血清檢測結果均表明d120-ELISA檢測陽性抗體時間晚于IDEXX10 d左右，但d10-ELISA方法可以鑒別出IDEXX試劑盒無法鑒別的免疫弱毒活疫苗TJM-F92或免疫滅活疫苗豬群中發(fā)生野毒感染的動物。
　　綜上所述，本實驗建立了具有良好敏感性、特異性和重復性的鑒別PRRSV野毒感染和弱毒活疫苗 TJM-F92免疫動物的 d120-ELISA方法，檢測試驗動物血清和臨床血清結果表明d120-ELIS