仙臺病毒F基因的表達與間接ELISA檢測方法的建立和應用.pdf

1、仙臺病毒(Sendai virus，SeV)屬于副粘病毒科副粘病毒屬，是一個單股負鏈RNA病毒，小鼠、大鼠、倉鼠和豚鼠等嚙齒類實驗動物均易感。仙臺病毒傳染性強、易擴散，一般呈隱性感染，是嚙齒類實驗動物最難控制的病毒之一，鼠群感染仙臺病毒后會改變體內(nèi)細胞免疫反應，干擾試驗結(jié)果，因此建立快速診斷方法十分必要。 目前，檢測仙臺病毒主要用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測仙臺病毒抗體，SeV可以在LICMK2和BHK21細胞上生長，但很難

2、獲得高滴度的病毒，雞胚培養(yǎng)雖然能獲得高滴度的病毒，但純化的病毒粒子保留有雞胚蛋白，干擾檢測的特異性。本研究利用大腸桿菌表達系統(tǒng)pQE31表達仙臺病毒F蛋白高抗原部分FP(S)，用純化的融合蛋白作為包被抗原建立ELISA方法，可用于仙臺病毒血清抗體的快速檢測。 1、仙臺病毒FP(S)基因的克隆、表達及抗原制備 根據(jù)已發(fā)表的SeV(gi：9627219) F基因序列設計特異性引物，以逆轉(zhuǎn)錄的仙臺病毒cDNA為模板，用RT-P

3、CR方法擴增出F基因高抗原性片段FP(S)，將其插入到pMD18.T載體中測序鑒定后，測序正確的FP(S)基因片段克隆入pQE31原核表達載體中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌M15，IPTG誘導表達，純化重組蛋白FP(S)。用SDS-PAGE和Western-blot對表達產(chǎn)物進行驗證，結(jié)果表明，表達的融合蛋白FP(S)分子量為26kD，與預期大小相符，能與SeV陽性血清發(fā)生特異性反應，說明FP(S)有很高的抗原性，可以作為檢測仙臺病毒血清抗體的抗原。