檢測GPV抗體的間接ELISA方法的建立及初步應(yīng)用.pdf

1、小鵝瘟(Gosling Plague，GPa)是由細小病毒科、細小病毒屬中的鵝細小病毒(GooseParVOVirus，GPV)引起的一種烈性傳染病。該病毒主要使1月齡內(nèi)雛鵝和雛番鴨發(fā)生的一種急性、高度接觸性、敗血性傳染病，傳染性強且死亡率高。危害與日齡密切相關(guān)，10日齡內(nèi)雛鵝發(fā)病率和死亡率可達100％，在易感群中的致死率高達70％，以后發(fā)病隨日齡增大而逐漸減少。但近幾年有報道稱該病的發(fā)病日齡有增大趨勢，超過30日齡的占14.3％，這可

2、能與鵝細小病毒毒力增強和基因變異有關(guān)。自1956年我國學者方定一首次發(fā)現(xiàn)并分離到病毒至今，國內(nèi)外一直有分離到該病毒的報告，說明該病已經(jīng)呈世界范圍流行，對養(yǎng)鵝業(yè)的威脅極大。 本試驗旨在研究鵝細小病毒抗體的ELISA檢測方法的建立，并初步應(yīng)用于田間試驗。小鵝瘟病毒一般不引起大鵝發(fā)病，可使大鵝呈現(xiàn)隱性感染，持續(xù)帶毒、排毒，從而造成病毒的水平傳播。小鵝瘟血清抗體的檢測不但能監(jiān)測鵝健康狀態(tài)，而且也能檢測疫苗免疫的抗體水平，特別是對隱性感染

3、帶毒的大鵝的檢測，對減少大鵝體內(nèi)毒株水平或垂直傳播具有一定意義。到目前為止對小鵝瘟抗體的檢測國內(nèi)外報道的有瓊脂擴散試驗和中和試驗，但是很多學者報道瓊脂擴散試驗靈敏度不高，并且需要高效價的抗血清及濃縮的尿囊液，而中和試驗有操作繁瑣、費時較長、費用大、實際應(yīng)用中不易推廣的缺點，為彌補上述兩種檢測小鵝瘟血清抗體的試驗方法的不足，而建立間接ELISA方法來檢測GPV的抗體，為疫苗免疫的抗體水平監(jiān)測和流行病學調(diào)查提供一定的基礎(chǔ)。 本試驗用

4、鴨胚增殖鵝細小病毒，氯仿處理、差速離心、PEG沉淀、Sephrose-4B柱層析綜合處理，提純病毒抗原。用該抗原與購買的小鵝瘟弱毒活疫苗免疫健康成年鵝制備高免血清，作為ELISA試驗的參考陽性血清，檢測ELISA OD值大于1.0。參考陰性血清是從偏遠的非疫區(qū)的農(nóng)村采自不同日齡不同種的非免疫的50只20日齡左右的小鵝的血清，檢測ELISA OD值小于0.3。檢測ELISA OD值小于0.3。從鵝血清中提取IgG免疫家兔，制備兔抗鵝酶標抗