牛精子質(zhì)膜提取及二維電泳分離精子全蛋白的技術研究.pdf

1、為了尋找X和Y兩種類型精子之間的蛋白差異，利用抗原抗體反應分離X、Y精子，進而實現(xiàn)性別控制，本實驗對牛精子質(zhì)膜提取及二維電泳分離牛精子全蛋白進行了研究。選擇手工玻璃研磨器研磨法結(jié)合氮氣壓力爆破法破碎精子細胞，借助掃描電鏡技術在3000倍下對其結(jié)果進行分析觀察和驗證。 在利用二維電泳技術分離牛精子全蛋白時，對不同的細胞裂解方法、不同蛋白上樣量、不同膠條長度的二維電泳結(jié)果進行了比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用尿素一鹽酸胍兩步法裂解精子，使用13c

2、m非線性固相干膠條(pH3～10)，能獲得較好的精子蛋白二維電泳效果。采用ImageMasterTM2DPlatinum軟件對圖譜進行分析，可檢測出約800多個蛋白質(zhì)點，分子量基本分布在10～100KD，等電點約為4～9的區(qū)域內(nèi)。切取凝膠圖譜上的2個蛋白質(zhì)點進行脫色，膠內(nèi)酶解消化以后利用MALDI-TOFMS分析測定，再通過數(shù)據(jù)庫查詢鑒定蛋白質(zhì)，結(jié)果表明有1個蛋白質(zhì)點獲得了滿意的肽指紋圖譜，搜索到7個匹配的肽段，覆蓋率為32％，符合蛋白