一氧化氮在海水和淡水淹溺型急性肺損傷中的表達(dá)研究.pdf

1、世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計每年發(fā)生淹溺死亡事件的約有40萬人，是人類意外死亡的重要原因之一。發(fā)生淹溺最常見的液性遞質(zhì)是淡水和海水。淡水淹溺主要常見于浴缸、游泳、水道及江河等。而在航海作業(yè)事故中，因溺水而死亡的約占52％-65％，居各種原因的首位。淹溺除10％-15％引起窒息死亡外，大部分主要為淹溺造成的急性肺損傷。
　　 急性肺損傷時常有大量的NO自由基的生成，后者可與O2-反應(yīng)生成毒性更強(qiáng)的過氧化亞硝酸鹽(ONOO-)。ONOO-除可引

2、發(fā)脂質(zhì)過氧化外，還可抑制Na+-K+-ATP酶，線粒體酶等多種酶活性，引起蛋白硝化，造成DNA鏈斷裂等，從而造成肺組織的廣泛損傷。因此，血清中NO的濃度可以間接反應(yīng)淹溺性肺組織的損傷程度。阻斷大量NO自由基的釋放對治療淹溺性月市損傷有積極的作用。
　　 本課題組在“九五”和“十五”期間對海水及淡水淹溺進(jìn)行了大量研究，成功復(fù)制了海水及淡水淹溺型急性肺損傷模型。本實驗采用淡水和海水復(fù)制急性肺損傷模型，觀察血清NO濃度的變化，并對兩者

3、的損傷程度進(jìn)行比較。觀察地塞米松對淹溺型急性肺損傷的影響，并觀察不同劑量地塞米松的干預(yù)效果。
　　 第一部分NO在海水與淡水淹溺型肺損傷中的表達(dá)研究
　　 目的：比較等量淡水和海水灌注對兔肺損傷程度的影響并觀察NO的變化
　　 方法：健康成年新西蘭兔21只隨機(jī)數(shù)字化分為3組(n=7)：即對照組、海水灌注組(經(jīng)氣管插管灌注配方海水2ml/kg，約5min灌注完)和淡水灌注組(同淡水灌注組方法灌注淡水12ml/kg)

4、。分別于灌注后0h、0.5h、1h、2h、3h、6h取兔頸總動脈血作血氣分析觀察PH、PaO2、PaCO2和血清NO的變化。于實驗終點處死動物，測定肺組織濕/干重比(W/D)、肺微血管通透指數(shù)、肺組織中丙二醛(MDA)含量、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性的變化。光鏡下觀察肺組織病理變化情況。
　　 結(jié)果：三組PH指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。灌注淡水或海水后動物出現(xiàn)低氧血癥及低碳酸血癥，血清NO水平增高(P＜0.0

5、1)；肺組織濕/干重比(P＜0.01)、肺微血管通透指數(shù)(P＜0.01)、肺組織中NOS及MDA含量增高(P＜0.01)；SOD活性降低(P＜0.05)。淡水淹溺組病理學(xué)改變與海水淹溺組比較相似，但損傷程度較輕。
　　 結(jié)論：海水淹溺較淡水淹溺所引起的血清NO升高更為明顯，肺微血管通透性、低氧血癥反應(yīng)更加嚴(yán)重。
　　 第二部分地塞米松對淡水淹溺型兔肺損傷血清NO的影響
　　 目的：觀察淡水淹溺型兔肺損傷中NO的變

6、化及地塞米松的干預(yù)作用。了解地塞米松對淡水淹溺型兔肺損傷的影響。
　　 方法：采用經(jīng)兔氣管內(nèi)灌注淡水制備淡水淹溺型肺損傷模型。將21只健康雄性新西蘭大白兔隨機(jī)分為3組：空白對照組、淡水淹溺組(經(jīng)氣管插管灌注淡水12ml/kg，約5min灌注完)、地塞米松干預(yù)(5mg/kg)組。分別于灌注后0h、1h、2h、3h、6h經(jīng)兔頸總動脈抽血作血氣分析觀察PaO2、PaCO2和血清NO的變化。并于實驗終點處死動物，測定肺濕/干重比(W/D

7、)、肺微血管通透指數(shù)、肺組織中丙二醛(MDA)含量、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性的變化。光鏡下觀察肺組織病理學(xué)變化情況。
　　 結(jié)果:淡水灌注后動物出現(xiàn)低氧血癥和低碳酸血癥，血清NO水平明顯增高(P＜0.01)。肺組織濕/干重比增高(P＜0.01)、肺微血管通透指數(shù)增高(P＜0.01)，肺組織中NOS、MDA含量增高(P＜0.01)、SOD活性降低(P＜0.05)。病理學(xué)觀察顯示：淡水淹溺組可見肺間質(zhì)和肺

8、泡水腫，肺泡腔內(nèi)可見以中性粒細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤。地塞米松干預(yù)后可減輕肺損傷程度。
　　 結(jié)論：淡水淹溺可明顯升高兔血清中NO；地塞米松干預(yù)后可減輕淡水淹溺型肺損傷。
　　 第三部分海水淹溺型肺損傷中NO的表達(dá)及地塞米松的干預(yù)作用
　　 目的：觀察海水淹溺型兔肺損傷中NO的變化及不同劑量地塞米松對其干預(yù)作用。了解地塞米松對海水淹溺型兔肺損傷的影響。
　　 方法：采用經(jīng)兔氣管內(nèi)注入海水制備海水淹溺型肺損傷

9、模型。將35只健康雄性新西蘭大白兔隨機(jī)分為5組：空白對照組、海水淹溺組、地塞米松低劑量(0.5mg/kg)、中劑量(1mg/kg)、高劑量(5mg/kg)干預(yù)組。海水淹溺組、地塞米松高劑量組、中劑量和低劑量組于手術(shù)穩(wěn)定20min后經(jīng)氣管插管注入配方海水(2ml/kg)同時經(jīng)頸動脈注入不同劑量的地塞米松。于注射地塞米松后1、3、6h取血測血清NO濃度，并于注射地塞米松6h后處死動物，迅速取出肺臟，測定肺濕/干重比(W/D)、肺泡灌洗液(B

10、ALF)蛋白含量和肺組織中丙二醛(MDA)含量、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性的變化，在光鏡下觀察肺形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化。
　　 結(jié)果：海水淹溺可以升高肺濕/干重比和肺泡灌洗液內(nèi)蛋白含量，升高血漿中NO含量，可顯著升高肺組織中NOS活性、增加MDA含量、降低SOD活性，引起肺形態(tài)結(jié)構(gòu)的病理變化。地塞米松可改善海水淹溺引起的肺損傷。但病理變化表明：地塞米松各劑量干預(yù)組與海水淹溺組之間未見明顯差異。
　　 結(jié)