融合蛋白K88ac-STⅡ和VP4-STI對實(shí)驗(yàn)小鼠的免疫效果研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文采用IPTG誘導(dǎo)法分別對重組菌株BL21(DE3)(pET28a-K88ac-STⅡ)和BL21(DE3)(pTHioHisB-VP4-STI)進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。后行SDS-PAGE和Western-blot檢測，在表達(dá)蛋白鑒定的基礎(chǔ)之上，通過透析的方法對目標(biāo)蛋白進(jìn)行純化回收。用PEG6000調(diào)整定量蛋白的濃度均為lmg/mL,加入Al(OH)3，至10％作為鋁膠疫苗，加入預(yù)先制備好的熱敏感腸毒素LTB(heat-labileenter

2、otoxinsubunitB)至20ug/mL作為預(yù)制實(shí)驗(yàn)疫苗。分別以預(yù)制疫苗、鋁膠疫苗、純化蛋白K88ac-STⅡ/VP4-STI和PBS免疫小鼠，優(yōu)化檢測免疫抗體水平的間接ELISA條件，通過比較四個免疫組的抗體水平，結(jié)合攻毒實(shí)驗(yàn)和免疫病理變化來評價(jià)表達(dá)蛋白作為免疫抗原的有效性和熱敏感腸毒素LTB作為免疫佐劑的效果。 結(jié)果，兩重組菌株分別在33Kda和40Kda處有特異性表達(dá)的蛋白條帶，與預(yù)期分子量大小一致，菌株BL21(D

3、E3)(pET28a-K88ac-STⅡ)的表達(dá)蛋白能夠被K88ac陽性血清特異性結(jié)合，菌株BL21(DE3)(pTHioHisB-VP4-STI)的表達(dá)蛋白能夠被VP4陽性血清特異性結(jié)合。純化蛋白K88ac-STⅡ/VP4-STI在賦予LTB作為免疫佐劑的條件下能夠有效地誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生針對共免蛋白(K88ac-STⅡ/VP4-STI)的抗體。預(yù)制疫苗攻毒存活的小鼠其回腸節(jié)段無明顯的病理變化。 結(jié)果表明，融合蛋白K88ac-STⅡ

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