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1、石河子大學(xué)碩士學(xué)位論文轉(zhuǎn)融合基因K88acSTⅡLTA2LTB苜蓿的獲得及其外源K88ac蛋白的檢測與分析姓名：倪娜娜申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：陳創(chuàng)夫祝建波20090601轉(zhuǎn)融合基因K88aeSTLTA／LTB苜蓿的獲得及其外源蛋白的檢測與分析Abstract￡物曼籃EnterotoxinEscherichiacoliismainpathogencausingpigletdiarrhea，whichhasre
2、sultintremendouseconomicloss，especiallyinourstockbreedingmanufactureManyresearcheshaveprovedthatK88acpilusandSTLTenterotoxinaremajorprotectiveproteinagainstEnterotoxinEscherichiacoliSoallofthemplayacrucialroleinvaccinalr
3、esearchAlfalfaisthehighestyieldingofthetemperateforagelegume，notedforitsfeedingvalue，andcontainsnoknownmammaliantoxins，pathogensorallergensTechnologyforthedryingofalfalfaandstorageascubesiswellestablishedItisimportantfor
4、thedevelopmentofanediblevaccine，tochoosealfalfaasvaccineproductionsystemsMethod—s—：InthisstudyweoptimizedanddevelopedthetransformationsystemofalfalfacultivarJinhuanghou，basedontheestablishmentregenerationsystemItisalsost
5、udiedthattheimmunogenityandstabilityoftransgenicalfalfaforeignK88acproteinResult；1EstablishmentofgenetictransformationsystemonthealfalfaAtthebaseoftheagrobacteriummedatedgenetictransformation，weoptimizedeveryapproachofge
6、netictransformationtothealfalfaTheoptimalpreculturetimeofexplantWas3daysThesuitableOD600ofengineeringbacterialsuspensionwas06TheappropriateconcentrationofKanwas30and50mg／Lduringthefirstandsecondstagesafterreinforcingcult
7、ivationfor7d2ObtainofgenetictransformationplantandidentificationItWasprovedbyPCRexaminationthattargetgenehasbeentransferredintothealfalfaItWasdisplayedfurtherbyRTPCRexaminationthattheforeigngeneWasofacertainexpressionlev
8、elinthepositiveplant3ResearchofimmunogenityandstabilityofforeignproteinItWasprovedthatforeignproteinexpressedhadimmum夠byDIBATheresultofELISAindicatedthattheimmunogenityofforeignproteinhadlittlerelationtotemperatureConc1u
9、sion——：weoptimizedeveryapproachofgenetictransformationtothealfalfaandconstructeditstransgenicsystemThesystemwassuccessfullyusedinacquiringthetransgenicK88aeSTIILTA2／LTBTheresultshowedthattransgenicplantsofalfalfaweregott
10、enandthegeneswereinsertedintogenomeofalfalfabyPCR、RTPCR、DIBAandELISAMoreoverELISAindicatedthatmmunogenityofforeignproteinhadlittlerelationtotemperatureItisofgreatsignificancefortheresearchoftransgenicalfalfavaccineagains
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