肝癌組織hugl-1異常剪接體的功能的研究.pdf

1、細(xì)胞極性是指細(xì)胞內(nèi)的形態(tài)、蛋白質(zhì)的分布以及功能等的不對(duì)稱(chēng)性，是有機(jī)體行使各種正常生理功能（細(xì)胞的不對(duì)稱(chēng)性分裂、細(xì)胞的遷移、細(xì)胞的免疫、神經(jīng)信號(hào)的傳導(dǎo)等）重要基礎(chǔ)。細(xì)胞極性的建立和維持對(duì)于胚胎和個(gè)體發(fā)育的過(guò)程是必需的，在病理?xiàng)l件下，丟失細(xì)胞極性會(huì)嚴(yán)重危害機(jī)體發(fā)揮正常功能形成腫瘤并且發(fā)生轉(zhuǎn)移。
　　 在果蠅體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)抑癌蛋白Lethalgiantlarvae(Lgl)，在建立細(xì)胞極性過(guò)程中發(fā)揮了重要的功能。Lgl在進(jìn)化上具有很

2、高的保守性，高等哺乳動(dòng)物的同源蛋白mLgl也參與調(diào)節(jié)細(xì)胞極性，大量深入研究結(jié)果顯示1gl的同源基因hugl-1，也起到抑癌基因的功能。Hugl-1在在多種常見(jiàn)的人類(lèi)癌癥例如，乳腺癌、肺癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸癌以及黑色素瘤中被發(fā)現(xiàn)蛋白表達(dá)量的下調(diào)，而且結(jié)腸癌淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移與Hugl-1蛋白表達(dá)下調(diào)相關(guān)，暗示了Hugl-1可能參與了腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過(guò)程。為了研究Hugl-1在癌癥中與肝癌發(fā)牛發(fā)展的相互關(guān)系，蘆雪峰等研究人員通過(guò)對(duì)80對(duì)肝癌組織和5

3、株肝癌細(xì)胞株的hugl-1基因組序列和mRNA序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)32.5％(26/80)的肝癌組織及20.0％(1/5)的肝癌細(xì)胞株發(fā)牛了頻繁的異常剪輯，但是在對(duì)應(yīng)的癌旁肝組織中并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)這些變化。蘆雪峰等克隆并且表達(dá)了2個(gè)具有代表性的Hugl-1突變體Hugl-1/△1414-1567/1667-1959和Hugl-1/△1190-1508能夠干擾內(nèi)源的Hugl-1的牛理功能（對(duì)肝癌細(xì)胞遷移和浸潤(rùn)具有促進(jìn)作用，明顯提高肝癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)

4、的成瘤的能力;野牛型的Hugl-1起到相反的作用）。但是Hugl-1是如何在肝癌的發(fā)生發(fā)展中的機(jī)理目前還不清楚。
　　 為了進(jìn)一步了解Hugl-1在癌癥發(fā)生發(fā)展中的作用，本論文成功的建立了研究細(xì)胞極性蛋白Hugl-1功能的Tet-On Advanced Inducible Gene Expression System以及建立了可誘導(dǎo)的三維培養(yǎng)MDCKⅡ細(xì)胞的系統(tǒng)。結(jié)果表明:在二維培養(yǎng)條件下，誘導(dǎo)表達(dá)Hugl-1的2個(gè)突變體Hug

5、l-1/△1414-1567/1667-1959和Hugl-1/△1190-1508能夠促進(jìn)MDCKⅡ細(xì)胞遷移，野牛型的Hugl-1/wt抑制MDCKⅡ細(xì)胞的遷移，說(shuō)明Hugl-1不儀在肝癌細(xì)胞中起到抑癌基因的作用在MDCKⅡ細(xì)胞中也起到類(lèi)似的功能，具有普遍的意義;在二維培養(yǎng)條件下，無(wú)論是突變體還是野生型的Hugl-1分布在胞漿和細(xì)胞膜上;三維培養(yǎng)條件下，Hugl-1的2個(gè)突變體Hugl-1/△1414-1567/1667-1959和H