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1、目的:⑴了解量子點(diǎn)標(biāo)記的角蛋白抗體QDs605-CK(AEI/AE3)熒光探針檢測(cè)人舌鱗癌荷瘤裸鼠移植瘤組織的可行性及其應(yīng)用價(jià)值。⑵通過(guò)比較量子點(diǎn)標(biāo)記的特異性角蛋白抗體605QDs-CK(AEI/AE3)熒光探針、免疫組化(IHC)染色及HE染色檢測(cè)人舌鱗癌荷瘤裸鼠下頜下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的精確度,探討檢測(cè)舌鱗癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移更為準(zhǔn)確的方法,為舌鱗癌的臨床診斷與治療提供一種新的探索性的檢測(cè)方法。
方法:傳代培養(yǎng)人舌鱗癌Tca8113
2、細(xì)胞,接種于20只裸鼠一側(cè)舌體內(nèi)(不過(guò)中線)。接種舌癌細(xì)胞10~14 d后,切除舌體移植瘤原發(fā)灶。切除的腫瘤組織分成兩份,一份制作石蠟包埋切片,行HE染色及免疫組織化學(xué)HRP-DAB染色;另一份即刻液氮冷凍,制作冰凍切片行量子點(diǎn)標(biāo)記的CK(AE1/AE3)免疫熒光染色。接種6周后,處死裸鼠,解剖下頜下淋巴結(jié),將同一淋巴結(jié)分為二份,一份作石蠟包埋半連續(xù)切片,行HE染色和IHC檢測(cè);另一份即刻液氮冷凍,制作冰凍切片行量子點(diǎn)標(biāo)記的特異性角蛋白
3、抗體熒光探針檢測(cè)。采用SPSS17.0軟件,統(tǒng)計(jì)量子點(diǎn)標(biāo)記CK(AE1/AE3)免疫熒光探針、免疫組織化學(xué)HRP-DAB染色及HE染色檢測(cè)裸鼠舌鱗癌下頜下淋巴結(jié)陽(yáng)性轉(zhuǎn)移率及微轉(zhuǎn)移率。
結(jié)果:①切除的腫瘤組織HE染色結(jié)果顯示,瘤細(xì)胞核大深染,異形性明顯,并可見(jiàn)病理性核分裂,證明裸鼠舌體移植Tca8113腫瘤成功。②免疫組織化學(xué)HRP-DAB染色,結(jié)果顯示裸鼠舌鱗癌腫瘤細(xì)胞中CK(AE1/AE3)呈陽(yáng)性表達(dá),為棕黃色的顆粒,主
4、要定位于腫瘤細(xì)胞膜或細(xì)胞漿;量子點(diǎn)標(biāo)記的CK(AE1/AE3)熒光探針檢測(cè),結(jié)果顯示量子點(diǎn)標(biāo)記的CK(AE1/AE3)定位于腫瘤細(xì)胞膜或細(xì)胞漿,發(fā)出紅色熒光,其定位與免疫組織化學(xué)HRP-DAB染色定位相同。③下頜下淋巴結(jié)組織HE染色,結(jié)果顯示腫瘤細(xì)胞位于淋巴結(jié)的被膜下竇或髓竇;免疫組織化學(xué)HRP-DAB染色,結(jié)果顯示淋巴結(jié)內(nèi)腫瘤細(xì)胞中角蛋白CK(AE1/AE3)呈陽(yáng)性表達(dá),主要位于細(xì)胞漿;量子點(diǎn)標(biāo)記的角蛋白CK(AE1/AE3)免疫熒光
5、染色,結(jié)果顯示量子點(diǎn)標(biāo)記的角蛋白定位于腫瘤細(xì)胞漿,發(fā)出紅色熒光,特異性強(qiáng),分辨率高,背景清晰,其定位與免疫組化HRP-DAB染色相同。④量子點(diǎn)標(biāo)記的角蛋白CK(AE1/AE3)免疫熒光法、半連續(xù)切片角蛋白CK(AE1/AE3)免疫組化染色及HE染色法檢測(cè)裸鼠下頜下淋巴結(jié)陽(yáng)性轉(zhuǎn)移率分別為66.7%、61.1%及27.8%,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,量子點(diǎn)標(biāo)記的角蛋白CK(AE1/AE3)免疫熒光法及角蛋白CK(AE1/AE3)免疫組化染色法檢測(cè)淋巴結(jié)
6、陽(yáng)性轉(zhuǎn)移率明顯高于常規(guī)HE染色法(x2=5.641,P<0.05),但量子點(diǎn)標(biāo)記的免疫熒光檢測(cè)和免疫組化檢測(cè)法比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=0.120,P>0.05)。
結(jié)論:⑴量子點(diǎn)熒光探針能特異性標(biāo)記裸鼠舌鱗癌組織中角蛋白CK(AE1/AE3),可用于檢測(cè)裸鼠人舌鱗癌移植瘤組織。⑵量子點(diǎn)標(biāo)記的角蛋白CK(AE1/AE3)熒光探針能準(zhǔn)確定位于裸鼠舌鱗癌下頜下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞漿內(nèi),發(fā)出紅色熒光,其特異性強(qiáng),分辨率高,背
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