β-丙內酯對重組TMV滅活的研究及以TMV為載體對FX22多肽的表達.pdf

1、煙草花葉病毒(tobacco mosaic virus，TMV)屬煙草花葉病毒屬(Tobamovirus)，是單組分帶有帽子結構的正義單鏈RNA病毒，基因組全長6395bp。病毒RNA由外殼蛋白(Coat Protien，CP)包裝成長約300nm，直徑約18nm的桿狀病毒粒子。TMV系統(tǒng)感染煙草后，CP表達量可達到被感染煙草總蛋白的7％。TMV的CP亞基由4個α螺旋組成，蛋白的N端和C端暴露在外部，選擇在CP的N、C端或CP內部的合適

2、位置插入外源序列，通常可使插入的外源序列展示于病毒粒子的外部。因此TMV常被作為外源小肽的表達載體進行研究。我們實驗室在TMV病毒載體的研究工作中，成功構建了TMV-F14、TMV-F11、TMV-S1241等重組TMV，表達了來源于不同動物病毒的多種抗原決定多肽，如口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus，F(xiàn)MDV)和SARS冠狀病毒等。 隨著TMV表達載體的發(fā)展，重組TMV的安全性問題越來越受到關

3、注。雖然重組TMV感染性比野生型病毒較弱。然而重組TMV病毒在野外擴散的風險仍然存在。為了解決這一問題，對重組TMV進行滅活處理后再投入使用成為一種安全有效的辦法。本文主要使用了β-丙內酯的方法對重組煙草花葉病毒TMV-S1241和TMV-F14進行滅活的研究。β-丙內酯是一種雜環(huán)類化合物，其作用機理是能通過與核酸的嘌呤堿基(主要是鳥嘌呤)反應破壞核酸的結構。在β-丙內酯對重組TMV滅活的研究中，發(fā)現(xiàn)使用1∶500濃度的β-丙內酯處理7

4、2小時，能夠將重組煙草花葉病毒TMV-S1241和TMV-F14完全滅活，同時又不破壞TMV-S1241所插入外源小肽的免疫原性。該研究結果表明，β-丙內酯是一種能有效滅活重組TMV的方法。到目前為止，β-丙內酯用于植物病毒的滅活還未有相關報道。這些滅活條件的數據對今后重組TMV病毒的大規(guī)模滅活和重組TMV疫苗的生產具有一定的參考價值。 在以TMV為載體表達外源小肽的研究過程中，我們發(fā)現(xiàn)并不是所有的重組TMV病毒都能系統(tǒng)感染對野

5、生型TMV敏感的煙草種類。在表達具有抗血栓作用的FX22多肽時，我們發(fā)現(xiàn)用融合了FX22多肽序列的重組TMV病毒接種Nicotianatabaccum Samsun nn煙草苗一星期后，接種葉上出現(xiàn)了枯斑癥狀。這一現(xiàn)象與野生型TMV接種Nicotiana tabacum cv．Samsun NN煙草苗后產生的抗性枯斑很相似。兩個星期后Nicotiana tabaccum cv．Samsun nn煙草苗也未形成系統(tǒng)花葉癥狀。我們推測可能是