TMV和PVX侵染后煙草和番茄中FdI及IP-L的表達(dá)分析.pdf

1、植物病毒與寄主互作是一個(gè)非常復(fù)雜的過程，其相互作用機(jī)制和效應(yīng)一直是一個(gè)重要的研究熱點(diǎn)。煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）是多數(shù)農(nóng)作物病毒病的主要病原之一。實(shí)驗(yàn)室前期利用酵母雙雜交系統(tǒng)，用與TMV血清學(xué)關(guān)系密切的ToMV CP作為誘餌蛋白篩選煙草文庫，獲得了一個(gè)與CP相互作用的FdI。另外，張等人通過酵母雙雜交系統(tǒng)篩選到的另一個(gè)與ToMV CP互作的煙草蛋白IP-L，雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)也表明了ToMV CP與

2、IP-L在植物體內(nèi)也可以發(fā)相互作用。后來實(shí)驗(yàn)證實(shí)這兩個(gè)蛋白均與TMV CP存在互作，其中FdI還可以與馬鈴薯X病毒（Potato virus X,PVX）的CP互作。那么FdI以及IP-L是否存在于除了煙草之外其他茄科作物中？其同源性如何？它們?cè)诓《厩秩厩昂蟮谋磉_(dá)變化如何？這些問題的回答對(duì)于更好的理解TMV和PVX與寄主互作的生物學(xué)效應(yīng)具有重要參考價(jià)值。
　　本實(shí)驗(yàn)中我們也對(duì)不同煙草品系以及幾種典型的茄科作物葉片中的FdI以及IP

3、-L進(jìn)行檢測(cè)，選取了4種煙草品系和3種茄科作物，通過提取總RNA，經(jīng)過RT-PCR，進(jìn)行克隆分析。結(jié)果證實(shí)了在這4種煙草品系中均檢測(cè)到了FdI和IP-L，在茄子、番茄、辣椒中檢測(cè)到了IP-L，茄子和番茄中檢測(cè)到了FdI。通過序列對(duì)比分析，F(xiàn)dI在這些植物葉片中核苷酸序列的同源性為95.1％～100％，而IP-L核苷酸序列同源性為88.4％～100％，氨基酸序列的同源性差異也不大。
　　另外，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)病毒的報(bào)道

4、已有很多，還有關(guān)于檢測(cè)植物病毒與寄主互作基因表達(dá)變化的研究。因此，我們也將通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，分析FdI和IP-L這兩個(gè)基因在病毒侵染后表達(dá)量的變化。我們選取了云煙和番茄，分別接種TMV和PVX，設(shè)置了25℃、30℃、35℃的溫度恒溫培養(yǎng)，另外光照和黑暗處理，在接種病毒23天時(shí)通過RT-PCR檢測(cè)到是否已經(jīng)接種上病毒，并結(jié)合云煙和番茄接種TMV、PVX后以及健康葉片通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR篩選了內(nèi)參基因，根據(jù)geNormPlus軟