藤梨根有效成分對結腸癌細胞增殖抑制作用及相關機制的研究.pdf

1、EGFR/MAPK信號通路已證明與結腸癌的增殖，分化，血管形成等密切相關。在我國，藤梨根是獼猴桃的根，臨床廣泛應用于消化道腫瘤的治療，主要活性成分為熊果酸，齊墩果酸等，文獻報道它們具有抗炎，抗腫瘤，保護肝功能，免疫增強等作用，但其確切的作用機制仍未闡明。本論文對熊果酸抑制結腸癌細胞株增殖及促進凋亡的機制作了初步探討，并觀察與奧沙利鉑合用的體內外效果。MTT實驗結果表明，熊果酸在四對腫瘤細胞株中對結腸癌細胞株IC50值最低，熊果酸具有比齊

2、墩果酸更強的細胞毒作用。其次熊果酸對EGFR表達陽性的HT-29結腸癌細胞株的生長抑制與下調EGFR/ERKl/2的蛋白磷酸化水平相關，Western Blot檢測到caspase-3，9的激活，和BcL-2，BcL-xL的表達抑制。接著我們從基因和蛋白表達水平觀察熊果酸對以SW620，RKO為代表的K-RAS，B-RAF和PIK3CA突變的結腸癌細胞株的作用靶點。實驗結果提示熊果酸下調MAPK，NF-κB信號通路的基因及蛋白磷酸化水平

3、抑制K-RAS和B-RAF突變結腸癌細胞株增殖及促進凋亡，其中熊果酸與ERKl/2抑制劑U0126合用后對細胞生長的抑制最明顯，實驗結果也表明熊果酸對K-RAS突變細胞株比B-RAF和PIK3CA突變細胞株細胞毒作用更強，可能與B-RAF和PIK3CA突變后AKT的激活有關。最后我們進一步觀察熊果酸與結腸癌臨床一線治療的奧沙利鉑合用的體內外效果及可能的作用機制，結果提示兩藥體外合用有協(xié)同作用，SW620裸鼠移植瘤試驗顯示合用有更好的抑瘤

4、效果。移植瘤蛋白檢測發(fā)現(xiàn)熊果酸合用組能顯著下調ERKl/2，IKKα蛋白磷酸化水平，并且能抑制CD34蛋白的表達；移植瘤的免疫組化結果也驗證了合用組能抑制腫瘤細胞增殖(PCNA)，促進凋亡（TUNEL），抑制ERKl/2和IKKα蛋白磷酸化水平和CD34蛋白的表達?？傊?，本研究結果提示藤梨根有效成分熊果酸能抑制結腸癌細胞增殖及誘導凋亡，其抑制增殖的作用可能是通過下調EGFR/MAPK，NF-κB信號通路蛋白磷酸化水平起作用的，其中抑制E