結(jié)腸癌細(xì)胞表達(dá)白介素-21抑制淋巴轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)腸癌細(xì)胞表達(dá)白介素-21抑制淋巴轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)研究姓名：張飛春申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：于躍明;馬志強(qiáng)20050301中 文 摘 要以 此 R N A 為模板進(jìn)行 1 L - 2 1 D N A 擴(kuò)增。 R T - P C R 擴(kuò)增所得 D N A產(chǎn)物在 1 % 瓊脂糖凝膠中電 泳， 并與親代C o l o n 2 6 M 經(jīng)以 上過(guò)程所得產(chǎn)物比 較，以 D N A M a r k 為標(biāo)準(zhǔn)， 觀察是否

2、在 4 3 4 b p附近出現(xiàn)陽(yáng)性產(chǎn)物以確定轉(zhuǎn)染是否成功。3動(dòng)物實(shí)驗(yàn) : 分別將 C o l o n 2 6 M / I L - 2 1( 實(shí)驗(yàn)組)及 C o l o n 2 6 M細(xì)胞 ( 對(duì)照組)懸液注射于小鼠 爪墊，觀察爪墊腫瘤生長(zhǎng)情況，每隔4 8 小時(shí)測(cè)量腫瘤體積。 小鼠 荷瘤生氏2 5 天后， 計(jì)算并比 較二種細(xì)胞株 淋 巴結(jié) 轉(zhuǎn) 移率 。將 C o l o n 2 6 M 八L - 2 1細(xì) 胞 與 荷C o l o n 2

3、 6 M / I L - 2 1 小鼠 脾細(xì)胞共培養(yǎng)為實(shí)驗(yàn)組，將 C o l o n 2 6 M細(xì)胞與荷 C o l o n 2 6 M小鼠 脾細(xì)胞共培養(yǎng)為對(duì)照組， 測(cè)量并比較二組脾細(xì)胞分泌的干擾素Y 含 量。結(jié)果:1淋巴轉(zhuǎn)移模型的建立: 我們成功地從淋巴 組織中分離培養(yǎng)出C o l o n 2 6 淋巴 轉(zhuǎn)移細(xì)胞株， 該細(xì)胞株經(jīng)免疫組化染色證實(shí)胞漿內(nèi)有癌胚抗原表達(dá)， 我們將該細(xì)胞株命名為C o l o n 2 6 M 。 該細(xì)胞株淋巴

4、 轉(zhuǎn)移率為 5 0 % ， 而C o l o n 2 6 細(xì)胞株淋l 轉(zhuǎn)移率 1 0 %( 經(jīng)四格表確切 概率法統(tǒng)計(jì)， 二者有差別a= 0 . 0 5 , P = O . 1 4 , P > O . 0 5 ) a 2 表達(dá) I L - 2 1的小 鼠結(jié)腸癌 C o l o n 2 6 細(xì)胞株構(gòu)建: 我們以攜帶 工 L - 2 1 c D N A 的 逆轉(zhuǎn)錄病毒L X S N為載體轉(zhuǎn)染 C o l o n 2 6

5、” 細(xì)胞， 獲得了 穩(wěn)定表達(dá) I L - 2 1 的C o l o n 2 6 M 細(xì)胞株， 命名為 C o n l o n 2 6 M / I L - 2 1 細(xì)胞株。提取的C o n l o n 2 6 / I L - 2 1 及 C o l o n 2 6 細(xì)胞株總 R N A ，于 1 % 瓊脂糖凝膠 電泳可見(jiàn) 2 8 S 明亮條帶， 說(shuō)明提取 了二種細(xì)胞 的完整R N 八 。以 此 R N A 為模板進(jìn)行 R T - P C