阿司匹林對人結腸癌細胞株Caco-2的抑制作用以及對Lgr5表達的影響.pdf

1、目的:探討非甾體抗炎藥阿司匹林對人結腸癌細胞株Caco-2生長增殖作用及其預防結腸癌發(fā)生的可能機制。
　　 方法:
　　 1.無血清培養(yǎng)法富集Caco-2細胞中腫瘤干細胞;
　　 2.流式細胞術測定Caco-2細胞CD24表達;
　　 3.采用噻唑藍(MTT)比色法檢測阿司匹林對Caco-2細胞生長增殖的影響;
　　 4.流式細胞術分析不同濃度藥物對Caco-2細胞凋亡的影響;
　　 5.

2、實時定量逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測Caco-2細胞中Lgr5和CD24mRNA的表達;
　　 6.免疫組化Envison法檢測不同濃度藥物對Caco-2細胞中Lgr5蛋白表達的影響。
　　 結果:
　　 1.Caco-2細胞在SFM中可產生懸浮腫瘤球,加入SSM后細胞可再貼壁生長;
　　 2.流式細胞儀結果顯示結腸癌細胞株Caco-2中CD24為陰性表達;
　　 3.MTT結果顯示阿司

3、匹林對Caco-2細胞生長增殖的抑制率逐漸增加,呈明顯的時間和劑量依賴性;
　　 4.AnnexinV/PI雙染法檢測Caco-2細胞凋亡的結果顯示:阿司匹林對Caco-2細胞促凋亡作用（包括早期凋亡和總凋亡）呈明顯的劑量和時間依賴性,不同濃度組和時間組與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;
　　 5.RT-PCR結果顯示應用阿司匹林干預不同時間后,Caco-2細胞中Lgr5mRNA的表達均較對照組降低,不同時

4、間組與對照組比較均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;
　　 6.免疫組化結果顯示,Lgr5在結腸癌細胞Caco-2的細胞漿和細胞膜表達,其中大部分定位于細胞質,少數定位于細胞膜,未見細胞核表達;對照組和5mmol/L阿司匹林組平均光密度分別為0.191±0.031,0.182±0.041,5mmol/L阿司匹林組與對照組相比,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),10mmol/L和15mmol/L阿司匹林組可見細胞膜、細胞質和細胞核均

5、被著色。
　　 結論:
　　 1.結腸癌Caco-2細胞在無血清培養(yǎng)基中可以生成懸浮的腫瘤細胞球;
　　 2.結腸癌Caco-2細胞CD24為陰性表達;
　　 3.NSAIDs阿司匹林分別呈時間和劑量依賴性地抑制體外培養(yǎng)的結腸癌Caco-2細胞的生長增殖以及促進細胞凋亡,其機制可能是通過抑制Lgr5基因的表達;
　　 4.Lgr5在體外培養(yǎng)的結腸癌Caco-2細胞的細胞質和細胞膜大量表達,以細胞質