環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)檢測單純皰疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型及人乳頭瘤病毒6型和11型的實驗研究.pdf

1、目的:建立單純皰疹病毒（Herpes Simple Virus）Ⅰ型和Ⅱ型、人乳頭瘤病毒（Human Papillomavirus）6型和11型的LAMP檢測方法。
　　方法:分別設(shè)計擴增各型病毒特異基因的LAMP引物，提取病毒DNA，配置LAMP反應(yīng)體系，60～65℃保溫約60 min，完成對靶病原體基因的擴增，肉眼及電泳判定擴增結(jié)果。LAMP擴增產(chǎn)物經(jīng)酶切進一步鑒定；設(shè)立對照組，評價LAMP方法的特異性；10倍系列稀釋模板，檢

2、測LAMP技術(shù)的敏感性。
　　結(jié)果:實驗組經(jīng)LAMP后，肉眼觀察到LAMP擴增產(chǎn)物的出現(xiàn)，電泳后呈LAMP特征性梯狀條帶，對照組均無擴增產(chǎn)物；HSV及HPV LAMP擴增產(chǎn)物經(jīng)相應(yīng)限制性內(nèi)切酶酶切鑒定正確，特異性實驗結(jié)果顯示與對照組無交叉反應(yīng)，具有特異性；LAMP可檢測到單純皰疹病毒Ⅰ型、單純皰疹病毒Ⅱ型、人乳頭瘤病毒6型、人乳頭瘤病毒11型DNA的最低濃度分別是1 pg/μL、10 pg/μL、1 pg/μL、1 pg/μL，其